研究背景:趋化因子是由小分子蛋白构成的细胞因子，能吸引白细胞迁移到感染部位，发生免疫学效应，它在机体炎症反应中具有关键作用。CXC趋化因子是趋化因子超家族的重要成员，与机体的炎症反应、损伤修复、血管形成和肿瘤的发生发展、转移侵袭等过程密切相关。其中，趋化因子CXCL8由上皮细胞和巨噬细胞等分泌，有CXCR1和CXCR2两个受体，它通过与两个受体的结合发挥对T细胞、中性粒细胞等机体内多种炎症细胞的趋化作用，它还在肿瘤细胞内表达，并参与肿瘤的血管生成和转移侵袭的过程。G31P是CXCR1/2受体拮抗剂，可与CXCR1/CXCR2受体高亲和力结合，但没趋化活性的CXCL8衍生物，它是通过基因定点突变方法构建所得到的，可与IL-8竞争性结合CXCR1/CXCR2受体，从而阻断IL-8与CXCR1/CXCR2的结合，发挥抗炎抗肿瘤的作用。　　吉非替尼是非小细胞肺癌的靶向治疗药物，常用于治疗转移性非小细胞肺癌(NSCLC)患者和接受过化疗的局部晚期肺癌患者，它是一种选择性表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂，通过选择性抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR-TK)而发挥作用。高剂量的吉非替尼可接受和转化表皮生长因子，从而刺激成纤维细胞增殖，这是造成肺损伤的重要发病机制。但研究发现，低剂量的吉非替尼能抑制表皮生长因子的增殖，从而抑制肺损伤的形成。　　博来霉素属碱性糖肽类广谱抗肿瘤药，它能抑制胸腺嘧啶核苷参入DNA并与之结合，使得DNA链断裂，常作用于增殖细胞周期的S期。博来霉素应用广泛，可治疗多种肿瘤，如鳞癌，包括皮肤、头颈部、阴道、宫颈、肺、食道等癌肿以及脑瘤、恶性淋巴瘤、恶性黑色素瘤等。博来霉素常见的不良反应有恶心、呕吐等，但最严重的是引起肺部的间质性肺炎，即纤维性肺泡炎（也称为肺纤维化、肺损伤），其致病性可高达10％。　　研究目的:本实验通过CXCR1/2的拮抗剂G31P与低剂量吉非替尼的联合用药，观察联合用药对小鼠肺癌A549细胞的抑制作用，并研究联合用药对博来霉素导致小鼠肺损伤的影响，为减轻化疗药物的毒副作用提供新的帮助。　　研究方法:(1)体内实验:建立博来霉素诱导的肺损伤动物模型:取C57BL/6J雌性小鼠60只，随机分为5组，分别为正常对照组（Control组）、博来霉素组(BLM组)、吉非替尼组（Gef组）、吉非替尼+G31P组（Gef+G31P组）、G31P组，每组12只。博来霉素组（BLM组）、吉非替尼组（Gef组）、吉非替尼+G31P组(Gef+G31P组)、G31P组经气管注射博来霉素0.5mg/kg，Control组经气管给予同等剂量生理盐水注射，缝合气管，密切观察老鼠活动状态和体重变化。Gef+G31P组和G31P组小鼠隔天经背部皮下注射G31P500μg/kg，其它各组同部位同等剂量注射生理盐水，Gef组和Gef+G31P组每周5天经胃给予吉非替尼(100mg/kg)。21天后，处死全部老鼠，进行标本采集和处理。取小鼠眼球血于EP管中，把小鼠双侧肺组织从体内剥离，观察各组小鼠肺组织的炎症反应状态，1/4肺组织固定于4％福尔马林溶液中，日后进行病理学检测，其余放于空白EP管中，用于检测MPO活力、提取蛋白进行Western检测、提取RNA进行PCR检测炎症细胞因子的表达、iNOS含量的测定等。　　(2)体外实验:体外培养肺癌A549细胞，分别用细胞增殖实验、细胞迁移实验等来检测低剂量的吉非替尼联合G31P对A549细胞体外增殖的影响。　　研究结果:(1)体内实验:对老鼠肺组织大体观察，Control组肺部正常，无炎症反应发现;BLM组老鼠炎症反应最明显，肺部组织淤红;相比BLM组，其它各组炎症反应都有一定程度的缓解，其中Gef+G31P组炎症最轻。　　组织病理学结果表明，Control组正常，BLM组老鼠的肺泡内全部充满红细胞，无明显肺泡组织;与其它组相比，G31P组和Gef组肺泡内红细胞明显减小且存在肺泡组织，G31P+Gef组肺泡内基本无红细胞，肺泡组织学形态正常。　　从老鼠的体重趋势和死亡率来看，G31P+Gef组体重基本与Control组相当，其它三组体重明显下降，以BLM组下降最为明显。G31P+Gef组死亡率明显低于BLM组、G31P组和Gef组，BLM组老鼠死亡率高达50％，G31P组和Gef组死亡率分别为30％和40％。　　通过qRT-PCR结果显示，BLM组老鼠炎症标记物TNF-α(p＜0.05)，IL-1β(p＜0.05)、IL-1(p＜0.05)IL-5(p＜0.05)和IL-6(p＜0.05)明显高于其它四组。相比之下，Control组的TNF-α(p＜0.05)、IL-1(p＜0.05)、 IL-5(p＜0.05)和IL-6(p＜0.05)的mRNA的表达水平最低，其它依次为G31P+Gef组、G31P组、Gef组。　　通过Western-blot结果显示，相对于Control组，G31P联合吉非替尼更能明显抑制肺损伤组织的NF-κB(p＜0.05)的表达。相比，BLM组蛋白标记物的表达最低，其次分别为Gef组、G31P组。　　对小鼠体内髓过氧化物酶(MPO)和一氧化氮合酶(iNOS)测定，结果表明G31P联合吉非替尼可以明显降低小鼠肺组织中MPO和iNOS的含量。　　(2)体外实验:用细胞抑制、细胞迁移等实验来检测G31P和吉非替尼对A549细胞的增殖和毒性作用，单独使用G31P组的结果显示对A549细胞没有明显抑制作用;G31P与低浓度吉非替尼联合应用，对A549细胞有明显的细胞抑制作用;G31P与高浓度的吉非替尼联合应用，对A549细胞的抑制作用结果也不太明显。　　结论:(1) G31P与低剂量的吉非替尼联合用药方案可以明显抑制肺癌A549细胞的生长，迁移。联合用药对肺癌A549细胞的抑制作用明显强于单独用吉非替尼组和单独用G31P组。　　(2) G31P联合低剂量的吉非替尼可以减轻博来霉素导致的肺损伤。相比单独用吉非替尼和G31P，G31P联合吉非替尼减轻了老鼠肺病理损伤，减少了TNF-α、IL-1、IL-5、IL-6等炎性细胞因子的表达，减少肺组织中性粒细胞浸润，更好地提高了老鼠的生命质量和小鼠生存率。