论文部分内容阅读
目的在胚胎植入前遗传学检测(preimplantation genetic testing,PGT)过程中,为保证胚胎活检产物不受父源(精子)和母源(颗粒细胞)遗传物质的污染,常采用卵胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)方式授精。但针对精子正常的夫妇,ICSI增加了治疗费用和显微操作的一系列风险。本研究通过临床数据分析和实验验证,拟证明常规体外受精(in vitro fertilization,IVF)在植入前遗传学筛查(preimplantation genetic testing for aneuploidy,PGT-A)中的可行性。首先,回顾性分析IVF及ICSI方式授精后行PGT-A患者的临床结局,探讨两种授精方式对PGT-A临床结局是否存在影响。然后,对采用IVF授精行PGT-A的病例,建立一种检测方法判断其胚胎全基因组扩增(whole genome amplification,WGA)产物是否存在亲源遗传物质污染,并与ICSI方式授精的胚胎扩增产物对比,分析污染程度是否增大并影响对胚胎整倍体性的判断,进而确定在PGT-A中采用IVF授精的可行性。方法第一部分:研究对象为2015年1月至2019年12月在中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院行PGT-A并于2020年4月前解冻移植了整倍体胚胎的患者共450例,其中采用IVF授精261例(IVF-PGT-A组),采用ICSI授精189例(ICSI-PGT-A组),分析其移植后的妊娠结局及子代出生情况。同时,收集其中在本院产科规律产检并分娩的患者的临床资料(共76例,其中43例IVF授精、33例ICSI授精),统计其妊娠期合并症与并发症、胎儿及附属物异常情况。分析在PGT-A中两种授精方式的有效性和安全性是否存在差异。第二部分:研究对象为2016年3月至2021年3月于中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院生殖中心行PGT的患者,将其囊胚检测后冻存的剩余滋养外胚层WGA产物作为研究材料。设置IVF组为解冻移植采用IVF授精后行PGT-A的整倍体胚胎、并顺利分娩的患者29例(共29枚囊胚);ICSI组为采用ICSI授精后行PGT、且胚胎诊断结果为整倍体的患者13例(共36枚囊胚)。对这些WGA产物及其亲源血液/唾液样本使用ASA芯片(Infinium Asian Screening Array-24 v1.0 Bead Chip,Illumina,California)进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphisms,SNPs)检测,分别采用M选点策略(母源杂合且父源纯合)、F选点策略(父源杂合且母源纯合)两种选点策略计算胚胎的杂合比例(理论上当不存在污染时,两种选点策略杂合比例一致),分析IVF组与ICSI组可能存在的亲源遗传物质污染比例是否一致、对检测结果的影响是否相同。结果第一部分:在PGT-A中采用两种授精方式,其妊娠率、着床率、活产率、流产率上无统计学差异(P>0.05)。ICSI-PGT-A组异位妊娠率明显高于IVF-PGT-A组(P<0.05),但其临床意义需要进一步扩大样本量确定。同时,虽然ICSI-PGT-A组流产物异常率明显高于IVF-PGT-A组(P<0.05),但流产物检测分辨率为100Kb,胚胎检测分辨率为10Mb,流产物检测报告异常均为小于3Mb,且例数较少(IVF组3例,ICSI组4例),故不能判定为PGT-A检测结果错误。此外,在妊娠期糖尿病、妊娠期高血压疾病、妊娠期肝内胆汁淤积、特发性血小板减少、前置胎盘、胎盘形态异常、胎盘植入异常、羊水过少、胎位异常、胎膜早破、胎儿生长受限、胎儿宫内窘迫发生率上,以及早产、巨大儿、低出生体重儿、极低出生体重儿及出生缺陷发生率上,两种授精方式的差异均未见统计学意义(P>0.05)。第二部分:两组ASA芯片SNPs检出率无统计学差异。在IVF组内,使用M选点策略时各染色体间杂合比例无统计学差异(P>0.05);使用F选点策略时22号染色体杂合比例较其他染色体低(P<0.05)。在ICSI组内分别使用两种选点方法对杂合比例进行比较,1-22号染色体间差异有统计学意义(P<0.05),且19号及22号染色体较其他染色体低(P<0.05)。在使用M选点策略时,除1号、4号、9号及19号染色体外,IVF组与ICSI组杂合比例总体方差无统计学差异(P>0.05)。在使用F选点策略时,IVF组与ICSI组杂合比例总体方差均无统计学差异(P>0.05)。但IVF组较ICSI组杂合比例高,差异有统计学意义(P<0.05),可知两种WGA方法存在差异。两组在各条染色体上,采用M选点策略和F选点策略得到的杂合比例均无统计学差异(P>0.05)。结果显示,ICSI组未发现母源污染,IVF组未发现主要来自父源或母源的污染,然而不能排除等比例的亲源污染,但临床可能性不大。结论第一部分:(1)在PGT-A中应用IVF和ICSI两种受精方式,未见对妊娠期合并症及并发症、胎儿及附属物异常情况、子代出生情况产生影响;(2)应用IVF受精方式所获得的PGT-A结果选择胚胎移植,未见临床结局差异,与ICSI方式受精所得结果同样可靠。第二部分:(1)在胚胎基因组扩增与检测过程中,与ICSI相比,IVF未增加亲源污染;(2)可推荐IVF作为非男性因素不孕且拟行PGT-A的授精方式。