盾壳霉酰基转移酶基因CMAT-1功能鉴定

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盾壳霉(Coniothyrium minitans)是植物病原真菌核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)的重寄生真菌,可寄生其菌丝和菌核,因此对于因核盘菌引起的菌核病具有良好的生防潜力,目前在欧美等地已有商品菌剂被应用于实际生产。盾壳霉与核盘菌菌丝对峙培养时,在酸性环境下可产生抗真菌物质(Antifungal substances, AFS),能显著抑制核盘菌菌丝的生长。实验室前期获得产AFS盾壳霉T-DNA单位点插入突变体ZS-1T8512,克隆了T-DNA插入影响的编码酰基转移酶(acyltransferase)的基因CMAT-1。本文以盾壳霉突变体ZS-1T8512为研究材料,验证了产AFS相关基因CMAT-1的功能,结果如下:与出发菌株ZS-1相比,突变体ZS-1T8512具有以下生物学性状:在PDA上的菌落形态与ZS-1明显不同,菌丝生长致密,生长速度显著减慢,不产孢,寄生致腐菌核的能力比ZS-1要弱,产抗细菌物质(Antibacterial substances, ABS)能力和生防能力都有所增强,尤其是产AFS能力显著增强。Real time PCR结果表明基因CMAT-1在突变体ZS-1T8512中大量表达,而在菌株ZS-1中微弱表达。构建了CMAT-1超表达载体,利用农杆菌介导转化(ATMT)方法转化ZS-1,获得了CMAT-1超表达转化子OE3和OE9,两株转化子均具有类似于突变体ZS-1T8512的特性,产生大量AFS。另外,构建了CMAT-1沉默载体,利用农杆菌介导转化突变体ZS-1T8512,获得了沉默转化子Si6。该转化子中CMAT-1表达量较突变体而言显著下降,但是仍然稍高于野生菌株,与核盘菌对峙培养时和野生菌株ZS-1一样,不产生AFS。这些结果表明基因CMAT-1在盾壳霉的生长、产孢和产AFS过程中起重要作用。CMAT-1的超量表达导致了盾壳霉中AFS的产生,对盾壳霉的抗生能力有明显的提升作用。研究盾壳霉中产AFS相关的酰基转移酶基因CMAT-1的作用机理以及调控机制有利于我们更好的研究真菌中AFS的产生和调控过程,也为盾壳霉中酰基转移酶的相关研究提供了基础,同时为盾壳霉的抗生作用应用于实际生物防治提供了可能。
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