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第一部分机械通气患儿气管导管内壁细菌生物膜形成及病原分析目的：观察儿科重症监护病房(Pediatric intensive care unit, PICU)机械通气(mechanical ventilation, MV)患儿气管导管(endotracheal tube,ETT)内壁细菌生物膜(biofilm, BF)内细菌分布情况及BF形态学特征方法：以我院治疗的35例MV患儿为研究对象。收集第一次拔除的ETT,经碘化丙啶(PI)和异硫氰酸荧光素标记刀豆蛋白A(FITCConA)染色后,激光共聚焦显微镜(Confocal Laser Canning Microscopy, CLSM)观察ETT-BF内细菌及胞外多糖(extracellular polymeric substances, EPS)分布情况,并收集ETT和下呼吸道分泌物进行细菌分离、培养和鉴定。结果：(1)35例MV患儿中,ETT表面培养阳性31例(88.57%)；17例ETT表面和下呼吸道分泌物同时分离出相同菌种,占ETT培养阳性的54.83%。在ETT-BF和下呼吸道分泌物中以金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌最常见。(2) CLSM观察可见,气管插管12h后,ETT表面已出现细菌粘附；48h时ETT表面可见大量短棒状或球状细菌粘附聚集,EPS较12h时显著增多,初步形成BF结构；72h左右细菌粘连成团块状,被EPS包裹,可见成熟BF结构形成；7天后细菌粘连成大片状,在其周围可见散在的微菌落。(3)35例MV患儿中,19例发生了呼吸机相关性肺炎(Ventilated-associated Pneumonia,VAP),其中经口插管10例(62.5%),经鼻插管9例(100%),但差异无统计学意义(P>0.05)。结论：MV时细菌极易在ETT表面粘附,形成细菌BF。ETT内壁细菌定植及BF形成与长时间MV患儿伴发呼吸机相关性肺炎之间可能存在一定相关性。第二部分气囊导尿管机械清理法干预气管导管内壁细菌生物膜形成的临床研究目的：探讨气囊导尿管机械清理法对机械通气(mechanical ventilation, MV)患儿气管导管(endotracheal tube, ETT)内壁细菌生物膜(biofilm, BF)形成的干预作用。方法：采用前瞻性、随机、对照设计,将MV患儿90例按体外循环下行先天性心脏病直视手术(体外循环组)和肺炎两病种随机分为气囊导尿管机械清理组(每天3次为A组、每天2次为B组)和对照组(C组)。平板菌落计数法计算ETT-BF细菌菌落数；PI/FITC-ConA染色后,CLSM观察ETT-BF结构以及生物膜厚度的变化；比较3组ETT和下呼吸道分泌物细菌菌种的变化及入住ICU时间、MV时间、呼吸机相关性肺炎(Ventilator-associated Pneumonia, VAP)发生情况。结果：(1)菌落计数：①体外循环组：A组ETT-BF细菌菌落计数较C组显著减少(P<0.05),B和C组ETT-BF细菌菌落计数在MV0-2d时差异不显著,但随着MV时间延长,其菌落计数差异有统计学意义(P<0.05)；②肺炎组：A、B组ETT-BF细菌菌落计数较C组显著减少(P<0.05)。(2)细菌培养阳性率：①体外循环组和肺炎组中A、B组下呼吸道分泌物培养阳性率较C组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),目下呼吸道分泌物菌种主要以正常菌群为主；②体外循环组和肺炎组中A、B组ETT培养阳性率较C组降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)CLSM观察,C组可见发出绿色荧光的云雾状的EPS将红色的细菌包裹,形成具有一定厚度的成熟的BF,A组仅见零散分布染成红色的细菌,未见BF形成；B组细菌数量较A组多,可见少量的绿色荧光。BF厚度：体外循环组C组中1d,3d,7d亚组分别为26.73±3.52μm,37.43±4.86μm,43.51±2.30μm,BF厚度随MV时间的增加而增加,差异有显著性(P<0.05)；A、B组BF厚度较C组均显著变薄(P<0.05),以A组效果更明显,且A组和B组之间BF厚度差异无统计学意义(P>0.05)。肺炎组经气囊导尿管机械清理后A、B组BF厚度均显著变薄(P<0.05)趋势同体外循环组。(4)体外循环组和肺炎组中A、B组VAP发生率与C组差异有统计学意义,三组患儿入住ICU时间、MV时间差异不显著,但A、B组入住ICU时间、MV时间有减少的趋势,A组更明显。结论：气囊导尿管机械清理法可有效的清除气管导管内分泌物、延缓和阻止ETT-BF的形成,降低VAP的发生,以每天3次效果更显著,可安全的应用于临床护理实践。