人Nanog基因shRNA慢病毒载体构建及其转染人胃癌裸鼠移植瘤的实验研究

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目的:构建对Nanog基因有干扰作用的慢病毒载体,探讨其在人胃癌细胞SGC-7901裸鼠移植瘤模型中的表达,检测其对裸鼠移植瘤生长的影响。方法:将前期已设计完成的Nanog基因特异性的siRNA构建于慢病毒载体中,制备携带shRNA-Nanog的慢病毒,同时构建胃癌裸鼠移植瘤模型,以Lentivirus-shRNA-Nanog转染的裸鼠作为实验组(目的组),以无关序列慢病毒转染的裸鼠(空载体组)及未转染的裸鼠(未转染组)作为对照组,测量肿瘤瘤体体积及质量的变化,活体荧光成像观察总荧光强度及转移情况,Western blot检测移植瘤组织中Nanog蛋白的表达情况,TUNEL法观察皮下移植瘤中胃癌细胞SGC-7901凋亡情况。结果:活体荧光成像显示转染27天后,运用活体荧光成像观察,目的组小鼠肿瘤总荧光强度明显低于空载体组和未转染组,裸鼠移植瘤瘤体积及瘤重小于未转染组及空载体组;Western blot显示目的组Nanog蛋白表达明显降低;TUNEL实验显示目的组凋亡系数明显增大,而空载体组与未转染组差异比较无统计学意义。结论:重组慢病毒lentivirus-shRNA-Nanog转染鼠后,成功下调Nanog蛋白表达水平,诱导胃癌细胞凋亡,明显抑制肿瘤生长,为胃癌的基因治疗奠定基础。
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