根瘤菌报告基因载体构建与转移

来源 :中国农业科学研究院 中国农业科学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zzdlily_7000
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该文针对快/慢生大豆根瘤菌(Rhizobium fredii/Bradyrhizobium japonicum)和慢生花生根瘤菌(Bradyrhizobium sp),研究了报告基因LuxAB和GFP质粒载体的构建与接合转移.包括:1.质粒载体pIO3-将带有那霉素抗性基因启动子的LuxAB基因克隆于质粒pTR102上,并从pCAM121切下Sm/sp抗性基因片断克隆到pTR102上构成质粒载体pIO3;质粒载体pIO5-将带有Psrp启动子、rrnBT<,1>T<,2>终止子的GFPmut1基因克隆于pTR102,形成载体pIO5;质粒载体pIO8-将带有P<,L>启动子的GFP基因克隆在pCAM121 mini-Tn5转座子反向重复序列之间,替换gusA基因,形成质粒pIO8.通过酶切电泳分析、平板抗性鉴定和荧光发光检测,证明了上述构建的3个质粒载体结构正确;2.采用三亲本杂交,分别将此3个质粒载体转移到大豆R.fredii DE333和大豆B.japonicum TA11-Nod<+>、LL18与花生B.sp 147-3、4-3-1等快/慢生根瘤菌,获得转移接合子DE333+LuxAB、TA11-Nod<+>+GFP、LL18+GFP、147-3+GFP和4-3-1+GFP.经细菌形态、菌落特性、生长强度、结瘤试验、质粒与发光检测鉴定,发耀眼荧光的接合子DE333+LuxAB被证明是根瘤菌,可用于土壤中和根瘤中根瘤菌的检测;发少绿色荧光的接合子TA11-Nod<+>+GFP被初步鉴定为根瘤菌.该文研究构建的系列质粒载体和一套标记大豆、花生根瘤菌的方法,为进一步研究根瘤菌生态学打下了一定的基础.
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