低含量芦荟色酮活性成分的分离纯化研究

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芦荟色酮是芦荟中特有的一类具有抗炎、抗氧化和抑制酪氨酸酶等生物活性的物质.本论文研究建立了一套可用于芦荟叶中低含量芦荟色酮的提取、分离及制备的方法.在没有任何标准品可参考的情况下,确定了高效液相色谱的分析检测条件并建立一套较优的芦荟色酮的提取富集方案.同时首次将高速逆流色谱技术应用于芦荟叶中低含量芦荟色酮的分离制备,建立了高速逆流色谱分离纯化芦荟色酮的新方法,并获得高纯度的芦荟色酮单体.由于芦荟色酮在芦荟叶中的含量很低,尽管已鉴定在库拉索芦荟中至少有8种芦荟色酮,但是没有任何标准品可以参考.因此建立合理的分析方法,找出芦荟样品中的目标色酮成分,是进一步研究的关键.本文根据文献报道,针对芦荟色酮的自身特点,通过分析柱的选择、流动相的选择、检测波长的确认以及洗脱条件的优化,建立了一套合适的芦荟色酮的高效液相色谱分析方法,为进一步的研究工作奠定了良好的基础.芦荟色酮的HPLC分析条件:ZORBAX SB-C<,18>色谱柱,5 μm,250×4.6 mm I.D.;DAD检测器,检测波长为284nm;流动相为甲醇/水(55/45),流速0.7ml/min;温度:室温.本论文针对芦荟色酮含量低、研究少的特点,优化芦荟色酮的提取方法,建立了较为成熟的提取富集方案.利用活性炭的吸附作用,将含量很低(0.0012%)的芦荟色酮从芦荟叶中充分的提取出来,再根据芦荟中各种成分在不同极性溶剂中分配能力的不同,去除大量杂质,使得目标组分得到富集.将芦荟色酮提取物Ⅱ用高速逆流色谱法进行进一步分离纯化,高速逆流色谱这一新兴技术的采用大大提高了实验效率,在获得高速逆流色谱制备高纯度芦荟色酮的新方法的同时,有效地减少了样品的损失,最大限度的分离出了芦荟色酮.研究结果表明,通过样品的前处理以及高速逆流色谱的分离纯化,可以获得HPLC纯度在95%以上的芦荟色酮单体.经过FAB-MS、<1>HNMR和<13>CNMR等方法的结构分析鉴定,证实分离所得物质为肉桂酰基-C-葡萄糖甙芦荟色酮.
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