论文部分内容阅读
目的:探讨苦寒中药黄连对SD大鼠血清色氨酸(Trp)及其两种主要代谢产物犬尿氨酸(Kyn)和5-羟色胺(5-HT)的影响。 方法: 1.遵照《中国药典》(2010版)测定实验用药黄连的表小檗碱、巴马汀、黄连碱、小檗碱含量,保证实验用药品质。 2.建立高效液相色谱仪-紫外检测器(HPLC-UVD)同时测定大鼠血清中Kyn、Trp、5-HT的方法。 3.经鉴定为合格的黄连常规制备水煎液。150只SD大鼠随机分为5个组别,黄连高、中、低剂量组分别给予高、中、低剂量黄连水煎剂灌胃干预,阴性对照组代以等体积纯水,阳性对照组以等体积氨苄西林水溶液(233mg/kg)灌胃。分别在第1、2、3周灌胃结束后随机抽取以上各组大鼠10只采集血清样本,HPLC-UVD法测定血清中Kyn、Trp、5-HT浓度。 结果: 1.经鉴定实验用黄连为味连,检测其表小檗碱、巴马汀、黄连碱、小檗碱有效含量分别为7.31%、1.01%、1.80%、1.91%。 2.HPLC-UVD检测大鼠血清Kyn、5-HT、Trp浓度的方法学考察 (1)方法A:以20%高氯酸为血清蛋白质沉淀剂,采用C18(250×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为50mmol/L磷酸二氢钾∶甲醇=80∶20(v/v),于波长225nm处可完成对SD大鼠血清中Kyn、5-HT、Trp浓度测定,其线性回归方程分别为SKyn=93.902×CKyn-1.0873(0.397284μg~1.51552μg,r=0.9995,n=3)、S5-HT=75.203×C5-HT-0.9348(0.386547μg~1.47456μg,r=0.9995,n=3)、STtp=105.91×CTrp-21.402(7.086696μg~27.0336μg,r=09995,n=3),平均提取回收率分别为101.15%(RSD=2.11%,n=9)、103.21%(RSD=3.77%,n=9)、90.69%(RSD=2.53%,n=9)。 (2)方法B:以10%高氯酸为血清蛋白质沉淀剂,采用C18(250×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为50mmol/L磷酸二氢钾∶甲醇=95∶5(v/v),于波长225nm处可完成对SD大鼠血清中Kyn、5-HT、Trp浓度测定,其线性回归方程分别为SKyn=105.18×CKyn-2.0379(0.115625μg~7.4μg,r=0.9999,n=3)、S5-HT=66.934×C5-HT-0.5102(0.0875μg~5.6μg,r=0.9999,n=3)、STrp=109.8×CTrp+37.73(1.6875μg~108μg,r=0.9998,n=3),平均提取回收率分别为104.11%(RSD=2.24%,n=9)、83.82%(RSD=3.75%,n=9)、87.79%(RSD=1.99%,n=9)。 3.黄连对大鼠血清Kyn、5-HT、Trp浓度影响 3.1、黄连对大鼠血清Kyn浓度影响 (1)氨苄西林组与空白组比较:第1、3周无显著差异(P>0.05),第2周呈显著下降(P<0.05)。 (2)与空白对照组比较:第1周低、中剂量组呈极显著上升(P<0.01),高剂量组呈显著上升(P<0.05);第2周低、中、高剂量组呈显著下降(P<0.05);第3周低剂量组呈显著上升(P<0.05),中、高剂量组无显著变化(P>0.05)。 (3)与氨苄西林组比较:第1周低、中剂量组呈显著上升(P<0.05),高剂量组无显著变化(P>0.05);第2周低、中、高剂量组无显著差异(P>0.05);第3周低、中、高剂量组无显著差异(P>0.05)。 3.2、黄连对大鼠血清5-HT影响 (1)氨苄西林组与空白组比较:第1周无显著差异(P>0.05),第2周呈显著下降(P<0.05),第3周呈极显著下降(P<0.01)。 (2)与空白对照组比较:第1周低、中、高剂量组无显著差异(P>0.05);第2周低剂量组无显著差异(P>0.05),中剂量组呈显著下降(P<0.05),高剂量组无显著差异(P>0.05);第3周低剂量组(P>0.05),中剂量组呈极显著下降(P<0.01),高剂量组无显著差异(P>0.05)。 (3)与氨苄西林组比较:第1周低、中、高剂量组无显著差异(P>0.05);第2周低、中、高剂量组无显著差异(P>0.05);第3周低剂量组呈显著上升(P<0.05),中剂量组无显著差异(P>0.05),高剂量组呈显著上升(P<0.05)。 3.3、黄连对大鼠血清Trp影响 (1)氨苄西林组与空白组比较:第1、2、3周均无显著差异(P>0.05)。 (2)与空白对照组比较:各剂量组第1、2、3周均无显著差异(P>0.05)。 (3)与氨苄西林组比较:各剂量组第1、2、3周均无显著差异(P>0.05)。 结论: 1.按《中国药典》(2010版)实验用药黄连鉴定为味连,其表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱含量均达到要求范围,可用于后续实验。 2.成功建立了大鼠血清中Kyn、5-HT、Trp浓度的测定方法A和方法B,两种方法均可通过HPLC方法学考察,以方法B为优。 3.一定剂量的黄连水煎剂对大鼠血清Trp及其代谢产物Kyn、5-HT浓度具有不同程度的影响。 (1)持续使用一定剂量黄连灌胃:第1周时可使大鼠血清Kyn浓度上升,第2周时可使大鼠血清Kyn浓度下降;第1、2、3周时可使大鼠血清Kyn浓度呈双向改变。 (2)持续使用一定剂量黄连灌胃:第2、3周时可降低大鼠血清5-HT浓度。 (3)持续使用一定剂量黄连灌胃:第1、2、3周内对大鼠血清Trp浓度均无明显影响。