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红树林作为一种特殊生态系统,地处陆地与海洋之间,常年遭受高盐、强辐射、频繁潮汐、强风、缺氧污泥的影响,生长于这类特殊植物体内的内生真菌有其独特的物种分布、代谢途径和代谢产物,已然成为药物先导化合物研究开发的的重要来源。 据报道,已有超过200种内生真菌从红树植物中分离得到,成为第二大类群的海洋真菌,虽然其数量庞大,但是单一的发酵培养方法却大大限制了微生物代谢途径的表达,以至于很多代谢产物不能产生,造成真菌资源的浪费。本文第一部分利用一株真菌多种次级代谢产物(One strain many compounds,OSMAC)策略对菌株Pestalotiopsis versicolor进行再开发,希望能激活这株真菌潜在的沉默途径,获得更多样的化合物。具体研究内容为:多种方式发酵;目标产物的分离纯化及结构鉴定;单体化合物体外活性初步评价;对不同培养基菌株代谢产物进行比较。 对菌株P.versicolor进行高盐(10%海盐)大米固体发酵,获得了16个化合物,分别是pestalachloride D(PR-01)、pestalachloride C(PR-02)、pestalachlorideB(PR-03)、大黄素(PR-04)、1,6,8-三羟基-3-(羟甲基)蒽醌(PR-05)、麦角甾-6,22-二烯-5α,8α-环二氧-3-醇(PR-06)、菜籽甾醇(PR-07)、3β-羟基-5-胆甾烯-6-酮(PR-08)、麦角甾醇(PR-09)、癸酸甘油酯(PR-10)、1,5,9-三甲基-1,5,9-环十二碳三烯(PR-11)、2-(4-羟苯基)乙醇(PR-12)、3-吲哚甲醛(PR-13)、对羟基苯甲醛(PR-14)、4-[羟基(4-羟苯基)甲氧]-苯甲醛(PR-15)、4,6-二羟基-1(3H)-异苯并呋喃酮(PR-16)。其中,PR-01对肿瘤细胞系有抗性;PR-03具有抗COX-2活性,IC50值为2.4μM。化合物PR-01为新化合物,化合物PR-01、PR-02、PR-03、PR-04、PR-05、PR-11、PR-12、PR-13、PR-15、PR-16均为首次从菌株P.versicolor中分离得到。 对菌株P.versicolor进行高盐(10%海盐)PDA葡萄糖液体发酵,获得了7个化合物,分别是pestalachloride C(PL-01)、6-甲基芦荟大黄素(PL-02)、大黄素(PL-03)、1,6,8-三羟基-3-(羟甲基)蒽醌(PL-04)、大黄素甲醚(PL-05)、邻苯二甲酸正丁酯(PR-06)和对羟基苯甲醛(PR-07)。化合物PL-02和PL-05为首次从菌株P.versicolor中分离得到。 对杯萼海桑S.alba内生真菌SaLC5-2-2-3进行1.2%海盐大米固体发酵,获得了10个化合物,鉴定了5个化合物结果,分别为对羟基苯甲酸(S01)、对羟基苯甲醛(S02)、邻苯二甲酸异丁酯(S03)、油酸甘油酯(S04)和α-亚麻酸(S05)。以上化合物均首次从杯萼海桑内生真菌中分离得到。对S01、S02、S04、S05进行了可引起粮食霉变的黑曲霉菌、镰刀菌和青霉菌的抗性测试,结果显示这四个化合物均无活性。