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变形链球菌(Streptococcusmutans)是革兰氏阳性的兼性厌氧菌,是口腔主要的致龋细菌之一。变形链球菌通过在牙表面粘附,利用口腔中的食物残渣产酸,导致牙表面脱矿,而变形链球菌本身可以适应这种酸性环境。变形链球菌利用食物中的葡萄糖产酸,利用蔗糖合成胞外多糖进行粘附。对于变形链球菌的环境适应及毒力相关基因有大量研究,但是调控机制并不完全清楚。细菌非编码RNA(smallnon-codingRNA,sRNA)是近年来的研究热点,目前对细菌的sRNA研究主要采用生物信息学预测与实验学方法验证相结合的手段。在细菌中,sRNA可以随着生长和环境的改变,如不同的氧气、温度、渗透压、pH值等发生变化。sRNA也与细菌的毒力表达密切相关,如细菌的致病性、耐药性等。sRNA还有广泛的应用前景,如用sRNA作为致病微生物的诊断标志物;用改性肽核酸(PNAS)--sRNA的反义试剂,作为微生物感染的替代疗法等。本研究的第一部分通过4种生物信息学预测的方法,对变形链球菌UA159基因组进行系统分析,预测得到变形链球菌中的sRNA共334条,其中40条至少由两种方法预测得到。针对这40条序列,采用RT-PCR进行初步筛选,检测到5条sRNA。采用qRT-PCR检测这5条sRNA在变形链球菌UA159的对数生长期和稳定期的表达,其中L10-Leader的变化最明显,表达量相对较高,选择其进一步研究。第二部分研究内容如下:1.变形链球菌UA159非编码RNA--L10-Leader的鉴定。通过经典的实验学方法Northernblot验证了L10-Leader在变形链球菌UA159中存在,且在对数生长期的表达比稳定期高,与qRT-PCR结果一致;qRT-PCR检测L10-Leader的表达在细菌的生长过程中呈下降趋势。2.变形链球菌不同临床分离株非编码RNA--L10-Leader的表达。在变形链球菌临床分离株中通过qRT-PCR检测到L10-Leader在2株细菌间的表达量存在差异,都随着细菌的生长呈下降趋势。3.不同生长条件下变形链球菌非编码RNA--L10-Leader的表达。在变形链球菌UA159的酸休克实验中发现L10-Leader在酸性环境中表达量升高;在不同的葡萄糖和蔗糖浓度中生长,该sRNA表达无明显变化。4.变形链球菌非编码RNA--L10-Leader靶mRNA的生物信息学预测及检测。通过生物信息学预测L10-Leader的靶mRNA,选择了5条靶mRNA在细菌的不同生长周期及酸休克实验中进行检测,在细菌的对数生长期靶mRNA表达量均高于稳定期,与L10-Leader的变化趋势一致;在酸休克实验中靶mRNA的变化比L10-Leader的变化更慢,幅度更小,在3.5h和4.5h时,靶mRNA表达都升高,与L10-Leader的变化趋势一致。本研究在变形链球菌中结合生物信息学方法和实验学方法鉴定了一条sRNA--L10-Leader,并检测得到一些变化规律,对了解变形链球菌生长及适应环境等生物学行为有重要意义。