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目的:B10细胞是新近发现的一种调节性B细胞，因其具有分泌IL-10的能力而命名，目前尚未有明确的表型来定义这群细胞，由于杜克大学Thomas F.Tedder研究组最早将B10表型定义在CD19+CD1DhiCD5+B淋巴细胞亚群，因此文献中提到的B10细胞一般仅指这一群细胞。B10细胞可以通过分泌核心细胞因子白介素-10(Interleukin-10，IL-10)调控多种靶细胞的功能，如抑制CD4+T细胞增生活化、抑制辅助性T细胞分泌炎性因子(IFN-γ、 IL-17和TNF-α)以及协同诱导调节性T细胞(Treg)的分化。目前已在实验性自身免疫性脑脊髓膜炎(EAE)、1型糖尿病(T1DM)、系统性红斑狼疮(SLE)、炎症性肠病(IBD)以及胶原诱发性关节炎（CIA）等动物模型中发现了B10细胞的免疫调节作用，将B10细胞过继回输给已发病小鼠或者在发病前打入，可使疾病缓解或推迟疾病的发生。然而，B10细胞在自身免疫性甲状腺炎中的研究还未见报道。Braley-Mullen等以IL-10敲除小鼠诱导肉芽肿性实验性自身免疫性甲状腺炎(G-EAT)，发现EAT持续不缓解。我实验组在以甲状腺球蛋白(Thyroglobulin，Tg)诱导的EAT模型中发现，普通BALB/c和C57BL/6小鼠不发生EAT，但敲除IL-10基因后，二者EAT发生率增加，提示IL-10在自身免疫性甲状腺炎的发生发展中可能发挥抑制疾病的作用。 自身免疫性甲状腺炎是一种慢性器官特异性自身免疫病，以单核细胞浸润甲状腺和甲状腺滤泡被破坏为特征，在人类又称为桥本病。碘诱导的NOD.H-2h4小鼠自发性自身免疫性甲状腺炎(SAT)模型是该病经典的动物模型，不仅免疫病理类型与桥本病相似，而且血清中抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)滴度升高。我实验组前期在该模型小鼠中发现，碘水喂养组小鼠脾脏CD1dhiCD5+CD19+B10细胞的比例较正常饮水组明显降低，且脾脏淋巴细胞IL-10 mRNA的表达水平也显著下降;同时我们在人的研究中也发现Graves病患者外周血CD1dhiCD5+CD19+B10细胞比例明显低于健康对照组（未发表数据），提示B10细胞数量和功能的缺陷可能参与自身免疫性甲状腺炎的发病，但B10细胞能否影响疾病的转归还有待进一步研究。 本研究拟建立IL-10敲除背景的NOD.H-2h4小鼠，探索IL-10在碘诱导的NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎中的作用，并且通过对NOD.H-2h4小鼠进行B10细胞治疗干预，以明确B10细胞对NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎转归的影响。 研究方法:本研究利用实验组已有的NOD.H-2h4小鼠和IL-10敲除(IL-10-/-)的C57BL/6小鼠建立了IL-10-/-背景的NOD.H-2h4小鼠并且获得了同批生IL-10-/+和IL-10+/+基因型NOD.H-2h4小鼠。分组方法:根据基因型分为3组:IL-10-/-组、IL-10-/+组以及IL-10+/+组，根据是否给予0.05％碘化钠饮用水分为:高碘喂养组与正常饮水组，根据喂养时间分为:喂养8周组和喂养16周组，共计10组（无IL-10-/-和IL-10+/+正常饮水8周组），小鼠于4周龄时启动高碘喂养。在观察终点记录小鼠的体重、脾重以及甲状腺重;取甲状腺组织行HE染色炎症评分和RT-PCR检测免疫相关因子mRNA的表达;取血清ELISA检测TgAb水平;取脾脏流式染色检测Th1/Th2/Th17/Treg细胞比例的变化。 B10细胞干预实验:4-5周龄受体NOD.H-2h4小鼠随机分为3组:1）B10细胞干预组、2）B-ve细胞干预组以及3）空白对照组，8周龄时予以0.05％碘化钠饮用水。体外磁珠和流式分离供体NOD.H-2h4小鼠(8周龄以内)CD1dhiCD5+B10细胞和CD1 dlowCD5-B-ve细胞，尾静脉注射至对应受体小鼠中，共在喂碘前和喂碘后强化打3次，每次打入约5*10^5个细胞，空白对照组打入PBS。过继转移后，定期眶后取血检测受体小鼠TgAb的变化，并在喂碘12周后处死受体小鼠。取甲状腺组织进行炎症评分，留血清检测TgAb，取新鲜脾脏流式染色检测Th1/Th2/Th17/Treg细胞比例的变化。 结果:1、IL-10-/-NOD.H-2h4小鼠相比同窝生杂合子和野生型NOD.H-2h4小鼠，易发生体重减轻和脾大（P＜0.05）;2、IL-10-/-组不论正常饮水还是高碘饮水8周、16周，其甲炎发病率与严重程度以及TgAb滴度与IL-10-/+和IL-10+/+组相比无显著差异;3、高碘饮水组IL-10-/-小鼠脾脏Th1细胞比例与IL-10-/+和IL-10+/+小鼠比较无明显差异，Th2细胞比例有所升高但未达到统计学差异，Treg、Th17细胞比例也明显升高，其中Treg细胞比例在高碘饮水16周、Th17比例在高碘饮水8周差异有统计学意义（P＜0.05）。4、高碘饮水组IL-10-/-基因型小鼠甲状腺内IFN-γ、T-bet、GATA3、TGF-β及ROR-γt的基因表达与杂合子和野生型小鼠无明显差异;各亚组小鼠甲状腺中IFN-γ和T-bet的基因表达随周龄和喂碘时间的增加而升高，并与甲状腺炎症评分呈显著正相关(P＜0.05);TGF-β mRNA水平在高碘饮水组显著高于正常饮水组(P＜0.05)，但是不随周龄和喂碘时间的增加而升高。5、B10细胞干预组与B-ve组和PBS组相比较，平均甲炎评分降低，甲炎发病率降低;6、TgAb水平:B-ve组＞PBS组＞B10细胞干预组，在喂碘后7周B-ve组与B10组具有统计学差异(P＜0.05)，在喂碘后12周B-ve组与PBS组具有统计学差异（P＜0.05）;7、B10组小鼠脾脏Th1/Th2/Treg细胞比例与B-ve组及PBS组无明显差异，但Th17细胞比例显著低于PBS组(P＜0.05) 结论:1、IL-10基因敲除不影响碘诱导的NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生和发展，这可能与其脾脏和甲状腺中促炎因子与抑炎因子的同向反应（Treg和Th17，IFN-γ和TGF-β）有关。2、B10细胞干预可降低碘诱导的NOD.H-2h4小鼠自身免疫性甲状腺炎发病率和自身抗体水平，可能部分是通过降低脾脏中Th17反应来实现的