甲型流感病毒是一种具有极强致病性和传播能力的流感病毒亚型，能够对人类健康造成严重危害，而且还会对社会造成巨大的经济损失。甲型流感病毒在宿主细胞内复制的核心是甲型流感病毒RNA聚合酶复合体。该复合体由PA、PB1和PB2三个亚基组成，复合体的蛋白分子量大小约为250kDa。在病毒颗粒中，甲型流感病毒RNA聚合酶复合体能够特异的结合流感病毒基因组的promoter结构，并且进一步能够和缠绕在核蛋白(NP)上的基因组RNA片段一起组成病毒的核糖核蛋白（RNP）。甲型流感病毒RNA聚合酶复合体能够捕获和剪切宿主细胞的mRNA，并以切割产生的帽子结构为引物，以基因组RNA片段为模板合成病毒自身的mRNA，从而使得病毒在宿主细胞中表达自己的蛋白。而且甲型流感病毒RNA聚合酶复合体还能以自己的RNA基因组为模板，不需要引物从头开始复制自己的基因组。甲型流感病毒RNA聚合酶复合体同时具有转录和复制两种功能，这两种功能有着截然不同的过程。揭示其工作机制对于研究RNA依赖的RNA聚合酶有着重大的科研价值;而且甲型流感病毒RNA聚合酶复合体作为病毒的核心，相对于病毒的其他组分，非常保守，是理想的药物靶位点，具有重要的应用价值。如果能够获得甲型流感病毒RNA聚合酶复合体的三维结构，这将对于了解其功能机制和设计新型抗流感药物有着极大帮助。　　因此，本项工作的主要研究目的是获得甲型流感病毒RNA聚合酶复合体的结构，并相应的展开功能研究。通过多次尝试，我们最终在昆虫细胞表达体系中，稳定表达了几种亚甲型流感病毒RNA聚合酶复合体。进一步的经过多次纯化摸索，幸运的得到了两种亚甲型流感病毒RNA聚合酶复合体:一种是在溶液状态中以单体形式存在的sub-3p-86(PA全长，PB1全长和PB2_N_1aa-86aa);另一种是在溶液状态中以二体形式存在的sub-3p-130（PA全长，PB1全长和PB2_N_1aa-130aa）。这两种亚甲型流感病毒RNA聚合酶复合体在结合promoter后有着不同的表型:sub-3p-86结合promoter后依然为单体;而sub-3p-130结合双链promoter或者5promoter（vRNA或者cRNA）会从二体形式变为四体，而其结合3 promoter（vRNA或者cRNA）后会促使二体解离形成单体。　　在获得了稳定的样品后，利用近年来快速发展的冷冻电镜技术，通过结合电子断层三维重构技术和单颗粒三维重构技术，成功的获得了分辨率为4.3(A)的sub-3p-130-vRNA promoter（结合了双链vRNA promoter sub-3p-130）的三维结构。对其结构进行分析发现，其与RNA依赖的RNA聚合酶复合体结构相似，都呈现一个笼子样的结构。进一步分析，观察到四个单体中存在两种相互作用界面:刚性界面和柔性界面。　　然后着重对这两种界面进行了分析。通过高通量突变筛选和生化实验分析，发现这两种界面对于病毒的活性都是必须的。结合以前的报道，本研究组提出了一个新的关于甲型流感病毒RNA聚合酶复合体的工作模型:甲型流感病毒RNA聚合酶复合体的寡聚状态负责其基因组的复制，甲型流感病毒RNA聚合酶的单体状态负责其基因组的转录。