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目的:构建DOCK8（dedicator of cytokinesis 8）核心功能区DHR2原核质粒,通过大肠杆菌转化诱导目的蛋白,探索目的蛋白最佳诱导条件,并通过目的蛋白多克隆抗体的制备,初步分析目的蛋白是否具有相应的免疫原性,为进一步探究DOCK8的核心功能区DHR2的免疫功能、分子机制以及防龋疫苗的构建提供基础。方法:本研究包括两个部分第一部分:pET28a-DOCK8/DHR2原核表达质粒的构建1.从SD大鼠肾脏提取总RNA,设计特异引物,通过逆转录PCR两步法获得DOCK8的核心功能区DHR2编码基因。2.利用T-A克隆构建中间载体pMD-DOCK8/DHR2质粒。3.通过定向克隆将鉴定序列正确的阳性质粒与pET28a（+）表达载体进行重组,获得重组质粒pET28a-DOCK8/DHR2;第二部分:pET28a-DOCK8/DHR2原核表达质粒的蛋白诱导、纯化及其多克隆抗体制备1.将鉴定正确的重组质粒pET28a-DOCK8/DHR2转化到大肠杆菌（E.coli Rosetta（DE3））,加入IPTG诱导目的蛋白表达。2.利用Ni-NTA亲和层析柱纯化DOCK8/DHR2蛋白,Western blot鉴定纯化后的蛋白。3.将纯化后的DCOK8/DHR2蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。4.间接ELISA法测定兔抗DOCK8/DHR2血清效价。5.Western blot检测兔抗DOCK8/DHR2血清的特异性。结果:1.成功扩增出DOCK8/DHR2基因片段,并构建了重组克隆载体pMD-DOCK8/DHR2和重组表达质粒pET28a-DOCK8/DHR2。2.重组表达质粒pET28a-DOCK8/DHR2经EcoRI、HindIII双酶切得到约1.2kb大小片段,与目的基因片段大小相同,经测序比对分析,目的基因序列同源性100%,无基因突变。3.经诱导剂IPTG的不同浓度诱导后,均以包涵体形式高效表达。通过SDS-PAGE电泳分析,发现pET28a-DOCK8/DHR2经诱导后在预期蛋白大小的位置（54 kDa）获得大量表达,且IPTG最佳终浓度为0.5mM,后采用不同温度和时间进行诱导条件优化发现,在37℃,4h诱导效果最佳。4.所需目的蛋白带His标签,经Ni2+亲和层析纯化后,获得预期大小的重组蛋白,所需目的蛋白带His标签,经Western blot鉴定,发现pET28a-DOCK8/DHR2表达的蛋白可与抗His单抗发生特异性结合,表明诱导的蛋白即目的蛋白。5.成功制备抗DOCK8/DHR2多克隆抗体,ELISA测定抗体效价可达1:1024000。6.经Western blot鉴定,抗DOCK8/DHR2多克隆抗体具有良好的特异性。结论:1.本研究成功构建了重组质粒pET28a-DOCK8/DHR2。2.将重组质粒pET28a-DOCK8/DHR2转化到Rosetta（DE3）感受态细胞后,用IPTG诱导表达,成功获得DOCK8/DHR2重组蛋白,且均以包涵体形式存在。3.DOCK8/DHR2蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。抗体效价高达1:1024000,且该多克隆抗体可与DOCK8/DHR2蛋白特异性结合。