基于HPTLC+策略的食品筛检方法学研究

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基于“HPTLC+”分析策略的测试方法已经成为分析化学领域一个新的热点前沿。与柱色谱的闭环工作原理不同,高效薄层色谱(HPTLC)是一个去中心化、开放的分析系统,分离过程结束后分离结果被保留在色谱板上而非废液瓶中。这一独特的优势使得HPTLC的分离结果可以方便地与很多无法与传统柱色谱系统兼容的检测手段实现无障碍融合。因此HPTLC不仅是一种通量大、操作简便和灵活性高的色谱工具,而且还可以作为多种离线检测方法高效集成融合的分析平台,在分析通量、简便性、精密度和适用范围等方面达到了较为理想的平衡,在食品筛检方面有良好的应用前景。本论文以HPTLC为分离-分析一体化平台,集成融合光密度法、质谱法、细胞生物传感和表面增强拉曼等多维定量与定性分析手段。在色谱分离和检测参数优化的基础上,通过谷物制品包装中荧光增白剂迁出残留、水果中克菌丹残留和银杏茶中化学降压药硝苯地平掺伪分析等实例应用,对HPTLC检测平台的实用性和可靠性进行验证。主要研究结果如下:1.以HPTLC为平台联用荧光光密度和原位质谱,建立谷物制品包装中荧光增白剂迁出残留的快速筛检方法。研究了流动性相配比、成像条件、基质效应及扫描参数对定量分析的影响,同时测定了方法的回收率和精密度。结果表明,甲苯/乙酸乙酯(10.0/0.3,v/v)的混合物作为流动相可以实现目标分子与干扰基质的完全分离;荧光模式、汞灯、365 nm激发波长和K400滤光片作为参数对得到的图像进行光密度扫描定量,色谱分离后的目标物斑点扫描结果在200~2000 pg/zone范围内呈现出良好的线性关系(R2=0.9999);小麦粉和大米粉中标准添加回收率78.5%~97.7%(RSD<4.5%)。此外,使用原位质谱实现了目标斑点在分子水平的可靠识别,进一步拓展了方法的实用性。2.以HPTLC为平台联用生物发光传感,建立水果样品中农药克菌丹残留的快速筛检方法。研究了不同薄层材料(硅胶、NH2-硅胶、中性氧化铝和酸性氧化铝)、流动相配比、浸渍后反应时间对定量分析的影响,同时测定了方法的回收率和精密度。结果表明,使用硅胶板为固定相,乙酸乙酯/甲苯(8/2,v/v)的混合物作为流动相可以实现目标分子与干扰基质的完全分离;浸渍菌液后反应4 min,硅胶板上的克菌丹对细菌的生物发光抑制达到最佳成像条件;拍摄照片后,通过专用软件Videoscan,对得到的生物发光抑制图像进行模拟像素扫描。结果表明,数字图片中目标物生物发光抑制斑点的积分结果在10~80 ng/zone范围内呈现出较好的线性关系(R2=0.9901),检测灵敏度<10ng/zone;不同水果样品(苹果、梨、杏、李子、樱桃和桃子)中标准添加回收率75.0%~96.0%(RSD<11.8%)。3.以HPTLC为平台联用生物发光传感和表面增强拉曼光谱,建立银杏茶样品中化学降压药硝苯地平掺伪的快速筛检方法。研究了不同薄层材料(硅胶、纤维素、硅藻土和聚酰胺)、流动相配比、浸渍后反应时间对定量分析的影响,同时测定了方法的回收率和精密度。结果表明,使用硅胶板为固定相,甲苯/乙酸乙酯(8/2,v/v)的混合物作为流动相可以实现目标分子与干扰基质的完全分离;浸渍菌液后反应6 min,硅胶板上的硝苯地平对细菌的生物发光抑制达到最佳成像条件;在此基础上,结合通用图像分析软件ImageJ的像素分析功能,对得到的生物发光抑制图像进行定量扫描。结果表明,目标物斑点在50~300 ng/zone范围内具有较显著的线性关系(R2=0.9985);两种银杏茶样品中标准添加回收率81.0%~92.8%(RSD<10.1%)。在像素扫描定量的同时,使用纳米银溶胶基底和633 nm激光(He∶Ne,激光光源)实现了对目标斑点在分子结构层面的可靠识别和确证。研究证明,通用免费的图像分析软件在HPTLC分析中可以替代昂贵的光密度仪器和专用软件,提升该技术在食品分析中的灵活度和性价比。
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