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甲烷氧化菌和甲烷单加氧酶作为重要的多功能微生物催化剂,应用潜力巨大,受到众多研究机构的关注。甲烷氧化菌素(mb)是甲烷氧化菌分泌的一种捕获Cu的小分子肽。目前国际上对mb的研究刚刚起步,但由于还没有分离纯化出高纯度的mb,因此对于mb还没有一个通用检测其含量的方法；另外,不同甲烷氧化菌所产生的mb的结构和组成也会有一定的差别,本论文主要研究了mb的检测方法建立、发酵合成及Methylosinus trichosporium3011菌种分泌的mb的初步结构特征。本实验的研究内容包括：根据mb具有的铜结合特性,建立了一个液态快速检测mb含量的方法,最适体系为chrome azurol S(CAS)、Cu2+、助色剂、缓冲溶液的添加量分别为2mL、1mL、4mL和0.5mL,反应时间为15min,利用紫外-可见分光光度计,在605nm波长下检测mb的含量。该方法具有操作简单、快速准确、实用性强等特点,为mb发酵生产的研究提供依据。采用CAS劈半平板法研究发现Methylosinus trichosporium3011(IMV3011)、 Methylosinus trichosporium OB3b(OB3b)、Methylococcus capsulatus3021(IMV3021)、 Methylomonas sp.GYJ3(GYJ3)这四种菌在使用nitrate mineral salt(NMS)培养基的情况下分泌mb的量相差不大,在一定量的Cu2+的培养基中,采用甲醇做为碳源时,菌种的生长速度加快,mb的分泌量也较甲烷做碳源时的大。以甲烷、甲醇分别作为碳源液态培养IMV3011时发现,在Cu2+的浓度由0μM渐变到1.5μM的过程中,Cu2+浓度为0μM时,二者的单位细胞产mb的量最大。将甲烷与甲醇作碳源的培养结果进行比较后发现,Cu2+浓度为0μM时,甲烷培养液中的mb含量高于甲醇培养液的；而在Cu2+浓度达到1.5μM时,甲醇培养中的mb分泌的总量却高于甲烷培养的。Cu2+浓度从0μM增加到1.5μM的过程中,甲烷培养液中的mb产量变化量大于甲醇培养的。由IMV3011菌株获得的mb能够促进包括其在内的4种甲烷氧化菌的颗粒性甲烷单加氧酶(pMMO)表达,表明不同的甲烷氧化菌同样能够吸收来自于IMV3011的mb捕获的铜,据此认为mb可能不具有菌属专一性。采用固相萃取技术纯化mb,结果表明,mb的固相萃取法的条件为洗脱液为60%乙腈水溶液,样品流速为2mL/min,上样量上限为200mL采用液质联用仪、荧光光谱和紫外吸收光谱对mb的分子结构进行推测,结果表明,IMV3011菌分泌的mb分子量可能为846.1441,推测其分子式为C30H38N8O13S4