旋覆花中倍半萜内酯类成分的抗炎作用及其机制研究

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哮喘作为一类异质性疾病,在通常情况下其特征表现为慢性气道炎症。哮喘的发作过程是一种可能由多种炎症细胞如肥大细胞、巨噬细胞、粒细胞(嗜酸、嗜碱、中性)等和细胞组分共同参与的复杂过程。旋覆花作为一种传统的中草药,应用历史悠久。现代药理学研究证明,旋覆花具有抗癌、保肝、抗糖尿病等多样的药理作用。在前期工作中,本课题组从旋覆花中分离并鉴定了38个单体化合物,并进行了抗炎活性筛选。通过初筛,本文选取具有抑制一氧化氮(NO)活性较强的倍半萜内酯类化合物6α-isovaleryloxy-1-hydroxy-4αH-1,10-secoeudesma-5(10),1(13)-dien-12,8β-olide(IVSE)和具有抑制白三烯C4(LTC4)、抑制骨髓源性肥大细胞(BMMC)脱颗粒和抑制信号传导及转录激活因子6(STAT6)活性的多重抗炎作用的倍半萜内酯类化合物1,6-二乙酰基大花旋覆花内酯(1,6-O,O-diacetylbritannilactone,ABLOO)进行其抗炎作用及机制研究。本文第一部分研究IVSE对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞NO生成的抑制作用及机制;第二部分:(1)在BMMC细胞中,考察ABLOO对免疫球蛋白E(IgE)/二硝基苯基化人血清白蛋白(DNP-HSA)诱导BMMC细胞生成LTC4和脱颗粒的抑制作用及其机制;(2)在肺癌上皮细胞A549中,考察ABLOO对白细胞介素4(IL-4)诱导嗜酸性粒细胞趋化因子-1(eotaxin-1)和花生四烯酸脂氧合酶15(ALOX15)表达的影响及其机制。第一部分结果表明:IVSE显著抑制NO的产生,其半数抑制浓度(IC50)为2.20μM,并显著抑制iNOS的蛋白表达。IVSE显著下调IκB激酶α/β(IKKα/β)的磷酸化水平、抑制核因子κB抑制蛋白(IκB)的磷酸化及降解,继而抑制了核转录因子-κB(NF-κB)p65的核转移。IVSE进一步抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38 MAPK的磷酸化。上述结果表明,IVSE抑制LPS诱导NO生成和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的作用是通过抑制NF-κB的活性和下调MAPKs磷酸化水平而实现的。另外,IVSE对基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的活性也具有确切的抑制作用。第二部分结果表明:(1)ABLOO显著抑制激活的BMMC细胞LTC4的产生(IC50为5.5μM)及其脱颗粒(IC50为10.5μM),其抗炎作用是通过下调胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)和磷酯酶Cγ(PLCγ)的磷酸化水平而实现的。(2)ABLOO有效抑制IL-4诱导的eotaxin-1和ALOX15 mRNA表达,且呈剂量依赖性。作用机制研究表明,ABLOO下调STAT6的磷酸化水平和抑制其转录活性,并且下调STAT6上游JAK3的磷酸化水平。因此,ABLOO对IL-4诱导A549细胞eotaxin-1和ALOX15 mRNA表达的抑制作用是通过抑制Janus激酶3(JAK3)和STAT6的磷酸化及降低STAT6的转录活性而实现的。旋覆花倍半萜内酯IVSE具有较强的抑制NO生成的作用;ABLOO具有抑制肥大细胞LTC4生成及其脱颗粒、抑制IL-4诱导的A549细胞eotaxin-1和ALOX15表达的多重抗炎作用。本文研究表明,旋覆花倍半萜内酯化合物IVSE和ABLOO具有较强的抗炎抗哮喘作用,其抗炎作用机制的阐明为先导化合物的发现,治疗哮喘及炎症相关疾病的新药研究提供了实验依据。
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