多核苷酸激酶（Polynucleotide Kinase,PNK）是一种细胞内重要的修复酶,参与碱基切除修复（Base-excision repair,BER）和非同源末端连接修复（Non-homologous End Joining,NHEJ）。多核苷酸激酶能够催化磷酸基团从三磷酸腺苷（Adenosine triphosphate,ATP）转移到DNA/RNA的5’-羟基末端,使其5’-末端磷酸化,从而参与DNA重组、DNA复制和DNA损伤修复等多种细胞过程。多核苷酸激酶活性异常会干扰细胞修复系统的稳定性,并诱发一系列人类疾病,如汤姆森综合征、沃纳综合征、神经退行性疾病、癌症等。因此,多核苷酸激酶被认为是重要的潜在生物标志物,可用于多种疾病的诊断和治疗,亟待发展高效、灵敏的多核苷酸激酶检测方法。然而,目前的检测方法通常存在程序繁琐、检测时间长、灵敏度低等问题。本论文为了克服以上不足,发展了一种简单快速、特异性好、灵敏度高的多核苷酸激酶检测方法。本论文中,我们提出了一种连接酶介导的恒温扩增方法用于多核苷酸激酶检测研究。我们以双链特异性核酸酶（Duplex-specific nuclease,DSN）作为信号放大的工具酶,无需昂贵复杂的热循环程序来放大目标信号,大大缩短了分析时间。同时我们设计了一种双功能的猝灭/荧光基团双标记探针Taqman,可同时作为连接反应的模板和信号输出的探针,极大降低了设计复杂程度。当靶标多核苷酸激酶存在时,催化5’羟化的供体RNA磷酸化,促使两个短RNA链（供体RNA和受体RNA）连接形成更长的RNA触发链,可有效触发双链特异性核酸酶介导的Taqman探针循环切割反应,产生增强的荧光信号。该方法表现出较高的选择性和灵敏度,检测限低至5?10^-6 U/mL,并可进一步用于PNK抑制剂的筛选以及复杂生物样品中PNK的测量。该方法可以进一步扩展到DNA、蛋白质和ATP等其他生物分子的精确定量,为生物医学研究和临床诊断提供了一种新的方法。