1.1研究背景和目的类风湿关节炎(RA)是一种免疫介导的多系统炎症性疾病,主要影响关节滑膜。该疾病可导致炎症、关节破坏、畸形和残疾。RA明确病因尚不清楚,过往一直认为RA主要由适应性免疫反应驱动,即自身反应性B和T细胞的过度活跃。然而,已经引起注意的是,固有免疫系统也积极参与到RA病理过程中来。固有淋巴细胞(ILCs)是一类缺乏谱系标记的淋巴细胞,是固有免疫系统的重要组成部分。ILCs能对组织微环境变化做出迅速反应,参与组织修复、稳态维持和抗病原体感染等。多项研究显示,RA中ILCs亚群的分布和功能发生了改变,提示ILCs在RA发病机制中具有亚群特异性作用。调节性固有淋巴细胞(ILCregs)是在小鼠和人的肠道中新发现的一群以分泌IL-10为特征的亚群。在炎症刺激过程中,ILCregs可在肠道中被诱导并通过分泌IL-10抑制ILC1s和ILC3s的活化,从而缓解肠道炎症。另一项研究则在体外利用维甲酸将ILC2s转化为ILCregs,同时发现在患有慢性鼻窦炎患者的鼻组织以及屋尘螨处理的小鼠的肺组织中ILCregs的数量显著上调。总之,ILCregs与炎症反应密切相关。然而,目前为止,关于ILCregs的研究报道仍十分有限,ILCregs是否参与调节RA的炎症反应从未被探究。因此,本课题通过对RA患者外周血、滑膜液以及滑膜组织中ILCregs的分布情况进行研究,结合临床相关数据,探讨其临床意义。通过体外细胞功能学实验,部分揭示ILCregs的功能作用。1.2研究方法:应用流式细胞术检测RA患者和健康对照组外周血中总ILCs、ILCregs频率,比较其差异性;运用统计学方法分析RA患者外周血中ILCregs频率与其临床数据的相关性;运用免疫荧光染色技术检测ILCregs在RA患者滑膜组织中的分布情况;采用辐照和活化的同种异体PBMCs作为饲育层细胞方法在体外培养扩增ILC2s;应用细胞共培养法验证ILCregs功能作用。1.3研究结果1.3.1 ILCregs在RA患者外周血、滑膜液的分布情况以及与病情严重程度相关性分析1)RA患者与健康对照组外周血中总ILCs频率无显著差异(P>0.05)。2)与健康对照组相比,ILCregs频率在RA患者外周血中显著增高,差异具有统计学意义(P?<?0.001)。3)RA患者外周血中部分ILCregs来源于ILC2s,但ILC2s并不是ILCregs的主要来源。4)RA患者外周血中ILCregs的频率与DAS28-CRP评分、CRP和ACPA均呈显著负相关(DAS28-CRP r=-0.5137,P=0.0102;CRP r=-0.5241,P=0.0086;ACPA r=-0.4173,P=0.0425),而与RF、ESR、年龄和病程无相关性(P>0.05)。5)ILCregs频率在同一RA患者的滑膜液中显著高于外周血(P<0.05)。1.3.2.ILCregs在滑膜组织的免疫荧光检测通过免疫荧光检测技术,证实了ILCregs的确存在于RA患者的滑膜组织中。1.3.3.ILCregs的培养诱导以及初步功能验证1)成功建立人ILC2s的体外培养扩增体系,包括优化ILC2s分选方案和利用辐照同种异体PBMCs作为饲养层细胞诱导ILC2s体外扩增。2)体外利用IL-2、IL-33和维甲酸将ILC2s诱导为ILCregs。3)对照组相比,ILCregs能高效的诱导Na?ve T转化为Treg(P?<?0.01).结论:本研究首次证实了ILCregs在RA患者外周血、滑膜液和滑膜组织中均显著高于正常人,且其频率与RA患者相关临床指标负相关。ILCregs能高效的诱导Na?ve T转化为Treg,提示其在RA中可能具有保护性作用且可能是RA治疗潜在新靶标。