玉米新病害—细菌干茎腐病的研究

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玉米是我国重要的农作物,近年来生产一直处于上升趋势。在玉米生产中,病虫害是高产稳产的重要限制因子,而一些新的或已往仅在极少区域发生的病虫害,对我国玉米生产带来了新的威胁。2006年7月,在新疆和甘肃玉米制种区的制种亲本PS056上发生了一种不同于已往报道的茎腐病,植株发病率80%-100%,对杂交种种子的生产造成了明显的影响。病害症状主要为植株矮小,发病部位组织表现为褐色干腐。实验表明,从PS056茎秆上病组织中获得的细菌分离物具有致病性,该病与已往报道的以软腐为特征的玉米细菌茎腐病不同。因此,确诊该种细菌茎腐病是玉米上的一种新记录病害,命名为玉米细菌干茎腐病(Bacterial Dry Stalk Rot)。本文对该病害进行了详细的研究,主要结果如下:1.从2006到2009年,干茎腐病在新疆、甘肃玉米制种地父本PS056茎秆上连续发生。病害的典型症状为植株矮小,茎部叶鞘表面出现不规则的黑褐色病斑,茎节发病处表皮消失,茎髓组织变褐并形成不规则的缺刻,褐变组织表现为干腐。病株茎秆扭曲、发脆,遇风极易倒折。根据对发病组织的显微镜检查、病原菌分离和形态鉴别、致病性测定、生理生化测定、16S rRNA序列分析及全细胞脂肪酸鉴定等结果,将引起新疆和甘肃干茎腐病的病原菌鉴定为成团泛菌Pantoea agglomerans。目前,国内外尚无报道由P. agglomerans引起的玉米细菌干茎腐病的病害。2.测定了P. agglomerans 16S rDNA和16S-23S rDNA (ITS)序列,设计并筛选到一对特异性引物Pa1/Pa2(正向引物Pal:5’GCTACAATGGCGCATACAA3’,反向引物Pa2:5’CGTCCTGCTCGTTACTTTT3’),能够在P. agglomerans中特异性扩增出375 bp的条带。构建了P. agglomerans分子检测技术,利用引物Pa1/Pa2能够进行玉米种子带菌和土壤带菌的检测。3.种子带菌检测结果表明,父本PS056和F1金玉9856种子均为外部不带菌,内部带菌;母本OSL190种子的内、外部均不带菌;特异性引物PCR检测表明,F1金玉9856种子中分离菌Pag1和父本PS056种子中分离菌Pag2都可以扩增出相同的P. agglomerans特异性目标条带(375bp)。温室和田间实验表明,引起干茎腐病的病菌P. agglomerans可通过种子传播,十壤带菌也是病害的主要侵染源之一,而花粉带菌可能是病害从父本向杂交种种子传播的主要方式。4.利用转座子技术,构建了致病性菌株P. agglomerans XJ1突变体库。通过对突变菌株的接种筛选,获得11个致病力丧失的突变体。经对Tn5插入位点的侧翼扩增,确认突变体PA121和PA71是由于yhfK基因和flhD基因的插入突变而失去致病力,Tn5在突变体PA121和PA71中为单拷贝插入。yhfK基因通过调控成团泛菌中hrpA基因的表达而导致病菌对玉米致病性丧失;flhD基因的突变导致了成团泛菌鞭毛发育受阻、细菌泳动性丧失并进而引起致病力丧失。5.利用病原菌P. agglomerans XJ1菌株对OSL190(抗病亲本)×PS056(感病亲本)的F2分离群体及其相关的亲本材料进行抗性鉴定,分析了玉米对P. agglomerans的抗性遗传规律。抗性鉴定结果表明,父本PS056为100%发病,母本OSL190均抗病,正交和反交的后代F1均表现为抗病,F2群体的抗、感分离比均符合3:1的比例,表明母本OSL190含有显性抗病单基因,父本PS056含有隐性感病基因。与自交系PS056有亲缘关系的其他自交系78599-1、沈137、齐319、E28和X178表现抗病,丹341和丹340则严重感病,推断PS056的感病性可能来源于丹341。
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