【摘 要】
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目的:观察delta阿片受体激动剂DADLE([D-Ala2,D-Leu5] enkephalin)对SH-SY5Y和原代神经元转录的影响及其作用机制。
方法:培养神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y和大鼠原代皮层神
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目的:观察delta阿片受体激动剂DADLE([D-Ala2,D-Leu5] enkephalin)对SH-SY5Y和原代神经元转录的影响及其作用机制。
方法:培养神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y和大鼠原代皮层神经元,原代神经元采用微管相关蛋白2(MAP2)免疫荧光鉴定其纯度。采用不同浓度的DADLE(100pM, 1nM, 10nM, 100nM, 1uM, 10uM)与SH-SY5Y及神经元共培养不同的时间(24h, 36h, 48h, 60h, 72h),应用[3H]-脲嘧啶掺入法测定SH-SY5Y细胞及神经元的转录水平,LDH法检测DADLE对细胞损伤的情况,MTT法检测神经元的活力。Western blotting技术检测神经元RNA聚合酶II合成的量及其活性的变化情况。
结果:DADLE在不同浓度均能抑制SH-SY5Y和神经元的转录,其抑制率与DADLE的浓度无线性关系;DADLE对两种细胞的转录抑制率与作用时间也不呈线性关系;对神经元,将DADLE洗脱后72小时,其转录抑制效果完全消失。10uM的DADLE作用72小时并未造成SH-SY5Y细胞的损伤。MTT检测显示DADLE不影响神经元的活力。Western blotting技术显示DADLE降低了神经元RNA聚合酶II的活性。
结论:DADLE能够抑制SH-SY5Y的转录,能可逆性抑制神经元的转录,并且对这两种细胞不造成损伤。DADLE抑制神经元转录的机制可能是通过降低RNA聚合酶II的活性实现的。
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