目的:糖尿病胃轻瘫(DGP)是一种继发于糖尿病(DM)基础上,以恶心、发作性呕吐、厌食、早饱感及餐后腹胀为主要临床表现;在排除胃机械性梗阻的条件下出现胃扩张、胃蠕动减慢和胃排空延迟[1],是糖尿病患者常见的一种并发症,严重危害患者的身体健康。据报道糖尿病患者DGP发病率高达30%-50%[2-4]。近年来国内外对糖尿病胃轻瘫发病机制的报道众多,主要是与神经病变、高血糖、胃肠激素紊乱、Cajal间质细胞(ICC)病变、微血管病变、胃肠平滑肌病变等因素有关。近年来研究发现胃肠平滑肌病变在糖尿病胃轻瘫的发生发展中起到非常重要的作用。胃肠道平滑肌是胃肠道动力的核心单位,各种因素最终都要通过胃肠道平滑肌来发挥调控胃肠道动力的作用。目前认为糖尿病胃轻瘫大鼠中存在胃电-机械失偶联的现象即提示DGP大鼠胃窦平滑肌本身可能存在异常。Rho A/ROCK信号通路是一种Ca2+非依赖性的平滑肌收缩调节机制,其主要的效应分子还包括肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)及磷酸化的肌球蛋白轻链(p-MLC)等,该信号通路激活后可以调节平滑肌的收缩。目前发现其与血管平滑肌、膀胱平滑肌、子宫平滑肌等的异常收缩有密切关系,研究[5]发现Rho A/ROCK的过表达可以加重糖尿病心肌病,引起血管平滑肌收缩异常,可以参与血管内皮细胞收缩,增强内皮细胞通透性[6]。但是Rho A/ROCK信号通路与胃平滑肌关系及其是否参与DGP的发病目前尚不清楚。本实验旨在观察活血化瘀通络中药对糖尿病胃轻瘫大鼠胃排空率及胃平滑肌病变及对Rho A/ROCK信号通路的影响,探讨其治疗DGP可能作用机制,为临床治疗糖尿病胃轻瘫提供理论依据。方法:清洁级健康雄性(Sprague Dawley)SD大鼠30只,体重为201-205g,适应性饲养大鼠2周后按体重随机分正常组、模型组和中药组,中药组干预的药物是由丹参、水蛭、地龙、川芎等中药组成。于正常组和模型组大鼠的腹腔给予注射链脲佐菌素(STZ)25 mg/kg,注射前STZ的使用按照1%比例用柠檬酸缓冲液(p H4,0.1 mmol/L)进行稀释。注射STZ后的72 h及1wk时,于大鼠的尾静脉处进行采血,只有大鼠的随机血糖不低于16.7 mmol/L时,方能确定动物造模成功。确定造模成功后,用生理盐水对正常组和模型组的大鼠进行灌胃,中药组予活血化瘀通络中药灌胃,灌药的比例为10ml/(kg·d);每天灌胃一次,共进行6周。于第6周末时候,给予大鼠酚红溶液灌胃,15分钟后按2ml/kg体重腹腔注射8%异戊巴比妥钠麻醉,然后剖开大鼠腹腔,结扎大鼠贲门及幽门,取出整个胃部,用来检测胃排空率;留取部分胃组织,置于4%多聚甲醛固定液中,苏木素伊红(HE)染色法观察大鼠胃组织的形态学改变;部分胃组织于液氮速冻后置于-80℃低温冰箱内保存,RT-PCR法检测大鼠胃组织中Rho A、ROCK1、ROCK2的基因表达情况,蛋白印迹(Western blot)法检测胃组织中p-MLC的蛋白表达。结果:1大鼠一般状况比较正常组大鼠的饮食正常,营养状况良好,反应敏捷,毛色有光泽,体重逐渐增加;其他两组的大鼠的表现出多饮、多食、多尿症状,营养状况较差,反应迟钝,精神不振,毛色无光泽,且模型组死亡2只大鼠。但是中药组大鼠的一般状况比模型组大鼠较好,饮食、营养及反应都尚可。2各组大鼠血糖及体质量的比较实验结束后,与正常组相比,模型组、中药组大鼠的体质量明显下降(P<0.05);与模型组相比,中药组大鼠的体质量明显增加(P<0.05)。与正常组相比,模型组、中药组大鼠的血糖值明显增加(P<0.05);与模型组相比,中药组大鼠的血糖值明显下降(P<0.05)。3各组大鼠胃排空率的比较实验结束后,与正常组相比,模型组、中药组大鼠的胃排空率明显下降(P<0.05);与模型组相比,中药组大鼠的胃排空率明显增强(P<0.05)。4 HE染色结果正常组大鼠的胃粘膜层次结构清楚,腺体排列整齐,血管丰富,平滑肌细胞呈梭形,细胞核规则,细胞核膜平滑,细胞密体明显,未见细胞空泡;与正常组相比,模型组大鼠的胃粘膜层次结构欠清,腺体排列紊乱,血管数量减少,平滑肌细胞变小,部分细胞凹陷,胞核不规则,细胞核褶皱,细胞密体减少,出现空泡样变性,基底膜增厚;中药干预组大鼠的胃粘膜层次结构较清楚,腺体排列较尚齐,血管数量较丰富,平滑肌细胞多呈梭形,细胞核较规则,细胞密体较明显,少量细胞空泡,基底膜未增厚。5各组大鼠胃组织Rho A m RNA、ROCK1 m RNA、ROCK2 m RNA的表达与正常组相比,模型组及中药组大鼠胃组织中Rho A m RNA的表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,中药组Rho A m RNA的表达升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组及中药组大鼠胃组织中ROCK1 m RNA的表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,中药组ROCK1 m RNA的表达升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组及中药组大鼠胃组织中ROCK2 m RNA的表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,中药组ROCK2 m RNA的表达均升高(P<0.05)。6各组大鼠胃组织p-MLC蛋白的表达与正常组相比,模型组及中药组大鼠胃组织中p-MLC蛋白的表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,中药组p-MLC蛋白的表达升高(P<0.05)。结论:1糖尿病胃轻瘫大鼠存在明显的胃排空障碍;活血化瘀通络中药能改善胃排空率,对糖尿病胃轻瘫有良好的治疗作用。2糖尿病胃轻瘫大鼠存在胃平滑肌收缩异常,可能与Rho A/ROCK信号通路的下调有关。3活血化瘀通络中药可能通过上调糖尿病胃轻瘫大鼠Rho A/ROCK信号通路改善胃平滑肌病变,促进胃平滑肌收缩,进而改善胃排空率。