柚子(Citrus maxima)为芸香科(Rutaceae)柑橘属(Citrus)常绿乔木果树,柚子含有非常丰富的药理作用和营养价值,果肉汁甜味美,在中国的药学典籍和古文的记载中都有体现。柚子花是柚子的干燥花蕾,含有丰富的挥发油成分,其有效成分可应用于香料、日化产品和药品等。目前关于柚子花其他化学成分的研究及药理作用的报道较少,对柚子花的化学成分进行研究,有利于资源的充分利用。用70%乙醇对打粉过筛后的柚子花进行加热回流提取,得到柚子花乙醇提取物。乙醇提取物经过不同极性的有机试剂分级萃取,得到石油醚部位、氯仿部位、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和水部位。对柚子花乙醇提取物及五个极性部位进行了抗氧化、抗肿瘤细胞及对小鼠前脂肪细胞(3T3-L1)增殖的抑制作用等活性评价。结果表明柚子花乙醇提取物及五个极性部位抗氧化效果较差,对肿瘤细胞表现出较好的抑制效果,且对3T3-L1细胞的增殖具有较好抑制作用。综合评价五个极性部位的活性,柚子花乙醇提取物经过萃取之后,主要活性成分集中在氯仿部位。因此选择氯仿部位进行进一步的分离纯化。氯仿部位经大型硅胶柱、葡聚糖凝胶柱及液相分析等层析技术,分离得到6个化合物,借助核磁共振(1H-NMR、13C-NMR、DEPT-135、1H-1H COSY、HMBC、HMQC等)和质谱等手段及文献比对,鉴定结构分别为:二十四烷酸羽扇豆醇酯(lup-20(29)-ene-3β-yl tetracosanoate)、β-谷甾醇(β-Sitosterol)、5-羟基-6,7,3’,4’-四甲氧基黄酮(5-Hydroxy-6,7,3’,4’-tetramethoxyflavone)、isolimonexic acid、7’-[(6’,7’-dihydroxy-3’,7’-dimethyl-2’-ocfenyl)oxy]coumarin(marmin)、Limonexic acid。6个化合物均为首次从柚子花中分离得到。研究了单体化合物对3T3-L1细胞增殖的抑制作用。MTT实验结果显示,化合物中marmin对3T3-L1细胞增殖具有显著的抑制作用,并改变了细胞的形态及细胞核的状态。因此对其作用机制进行了进一步的研究。实验结果表明marmin通过介导细胞凋亡来抑制3T3-L1细胞的增殖,能够显著地升高胞内活性氧(ROS)水平。在mRNA水平上marmin可以升高Bax/Bcl-2的比值,及促凋亡基因p53mRNA的表达,但对基因p21没有明显的影响。在蛋白水平上,marmin可以上调p-JNK的蛋白表达,同时下调p-p65及p-ERK1/2的蛋白表达,说明marmin可能通过激活JNK的活性而激活JNK信号通路,而抑制p-p65及p-ERK1/2信号通路共同作用来诱导细胞凋亡。对柚子花总黄酮、总皂苷、挥发油和总多糖进行提取。使用不同的对照品来绘制标准曲线,测得四大类的含量,分别为总黄酮含量25.76%,总皂苷含量35.38%,总多糖含量34.55%,总挥发油得率2.61%。研究了提取物分离得到的四大类物质对3T3-L1细胞增殖的抑制作用,其中总黄酮表现出非常好的抑制活性。通过检测细胞凋亡、细胞周期、凋亡相关基因的mRNA及蛋白水平的表达来初步探究总黄酮对3T3-L1细胞的作用机制。结果表明:总黄酮可以明显的引发细胞早期凋亡,升高胞内ROS水平,形成凋亡小体,上调细胞内p21及p53基因的mRNA相对表达量,Bax与Bcl-2的比值也明显增加,在蛋白水平上可显著上调p-JNK的蛋白表达,同时下调p-p65蛋白表达,而对p-ERK1/2蛋白表达的影响则不明显。