磺胺甲基嘧啶单克隆抗体的制备与鉴定

被引量 : 0次 | 上传用户:akiheeca
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
磺胺类药物是预防和治疗细菌感染性疾病的重要药物。由于具有经济、使用方便、化学性质稳定及治疗某些疾病有特效等特点,使之在畜牧业生产上的应用十分普遍。由于大量或长期使用,使得磺胺类药物在体内蓄积,造成其在动物组织内残留,人类食用被污染的动物食品后,可导致机体内正常菌群产生耐药性,引起人的中毒或者过敏性反应,许多国家和组织规定了其最高残留限量(MRL)为0.1mg/kg,甚至不得检出。 国内外已建立了很多理化方法检测动物性食品中残留的磺胺药。尽管该法比较灵敏、精确,但样品前处理繁琐、操作步骤冗长,需耗费大量溶剂,费用高,限制了它的广泛使用。作为一种快速、灵敏、特异的方法,酶联免疫吸附测定法正逐渐应用于药物的残留检测。 作为一种重要的磺胺类药物,磺胺甲基嘧啶(SM1)在磺胺类药物的使用中占很大比例。它的分子量为264.38,为半抗原。分子结构中具有芳伯氨基,可进行重氮化反应与载体蛋白连接。本研究在分析磺胺甲基嘧啶免疫特性的基础上,选用牛血清白蛋白(BSA)作为连接载体,同时进行磺胺甲基嘧啶与卵清蛋白(OVA)的偶联,运用单克隆抗体技术生产出磺胺甲基嘧啶的单抗,为建立磺胺甲基嘧啶的免疫学检测方法提供了关健的材料。主要研究结果如下: 1、试验一分别用戊二醛法和重氮化法把半抗原SM1和载体蛋白BSA、OVA偶联制备了全抗原,并利用SDS-PAGE和紫外扫描做了相应的鉴定。 2、试验二采用戊二醛法连接的人工抗原免疫动物以后没有抗体产生;重氮化法将磺胺甲基嘧啶和BSA的偶联的产物SM1-BSA免疫动物以后产生了高效价的抗体。 3、试验三利用业已成熟的单克隆抗体技术,用SM1-BSA抗原免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与NSO瘤细胞用50﹪的PEG4000进行细胞融合,用HAT培养基筛选培养,以SM1-OVA包被抗原检测杂交瘤细胞培养上清,获得了112株产生磺胺甲基嘧啶抗体的杂交瘤细胞株。对强阳性克隆以有限稀释法连续克隆三次,建立了3株分泌高亲和力的抗SM1单克隆抗体杂交瘤细胞株SM12B1、SM13H5、SM14E11,培养上清的ELISA效价分别为1∶512、1∶640、1∶320。以此三株杂交瘤细胞,腹腔注射Balb/c小鼠诱生腹水,其ELISA效价分别为1×10-7、1×10-7、5×10-6。这些单抗与其他SAs以及药品的交叉反应率很低(<0.4﹪)。
其他文献
本文介绍了地源热泵系统的发展前景及其特性,通过总结地源热泵地下换热器传热模型的研究现状,指出现今仍没有准确描述其传热特性的三维数学模型。据此,本文结合本实验室的地源热
本文通过对荣华二采区10
期刊
本文采用人工控温控湿进行生产,对火腿新工艺进行了一系列探索研究: 注射腌制法代替传统的干腌,使成品盐含量得到标准化控制。采用盐水注射器对火腿进行深层定量注射,通过实验
本文从生产实际与效益出发,研究了用锌盐生石灰纯碱法加工松花皮蛋的新工艺,分析了锌法松花皮蛋新工艺料液及皮蛋内质Na0H和Zn2+浓度变化规律与作用机理以及不同浸泡期温度对皮
有机磷农药残留超标是制约我国浓缩苹果汁出口的一大瓶颈。本课题在优质苹果浓缩汁加工技术和成熟的农药残留分析方法的基础上,研究浓缩苹果汁加工中降低甲拌磷、甲胺磷、乐果
本课题系“十一五”国家科技支撑计划项目“工业高效水力模型及典型产品开发研制”(项目编号:2008BAF34810-I)课题研究内容之一。   大型脱硫泵在火电厂烟气脱硫系统中起着
现有屏蔽泵存在效率低、能耗高、气隙要求严的缺点,永磁屏蔽泵可以减少屏蔽泵转子的铁损,从而大大提高机组效率,可使定、转子气隙相对较大,增加泵的使用寿命。将现有屏蔽泵开发为
目的:探讨重组人脑利钠肽对急性重症心力衰竭患者治疗效果及预后的影响.方法:纳入笔者所在医院2017年1月-2018年10月收治的100例急性重症心力衰竭患者.采用随机数字表分为两
目的:在已有的研究基础上,研究珠母贝糖胺聚糖(GAG)抗L白血病作用,探讨其在抑制肿瘤血管生成、增强机体免疫力方面的抗肿瘤作用机理。 方法:1.双酶法提取珠母贝GAG粗品(CPG),DEA
本文通过对荣华二采区10
期刊