论文部分内容阅读
目的：探讨交通相关PM2.5是否激活Jurkat T细胞内三磷酸肌醇受体和兰诺定受体通道而引起钙稳态失衡,以及Ca2+-Mg2+-ATP酶对钙稳态和钙调蛋白对钙信号的调节作用,为进一步认识汽车尾气的免疫毒性机理提供理论和实验依据。方法：MTT方法测定交通相关PM2.5对Jurkat T细胞的增殖毒性；荧光分光光度法检测不同浓度PM2.5组、肝素处理组、肝素和PM2.5组、普鲁卡因组、普鲁卡因和PM2.5组细胞内[Ca2+]i的变化；试剂盒测定细胞Ca2+-Mg2+-ATP酶活力；QRT-PCR和Western Blot测定细胞内钙调蛋白(CAM)的mRNA和蛋白表达。结果：1.5μg/mL、20μg/mL、80μg/mL PM2.5组Jurkat T细胞增殖功能与生理盐水组比较无显著差异；在320μg/mL和800μg/mL剂量时,对细胞的24h和48h增殖功能有抑制作用,与生理盐水组比较有显著性差别p<0.05。2.不同浓度PM2.5刺激静息和激活Jurkat T细胞3小时后,100μg/mL PM2.5刺激细胞内钙离子浓度最高,当PM2.5浓度增高到200μg/mL时,细胞内钙离子开始降低,以激活态细胞显著；生理盐水静息组和激活组、100μg/mL PM2.5静息组和激活组作用Jurkat T细胞1h、3h、6h、12h后,100μg/mL PM2.5静息组和激活组刺激3h细胞内钙离子浓度最高,且随着时间的延长细胞内钙离子逐渐降低,各组间差别显著(p<0.05),且与各自生理盐水组有显著性差异(p<0.05)3.不同浓度肝素与100μg/mL PM2.5共同孵育静息态细胞3h,100μg/mL和120μg/mL的肝素可抑制PM2.5刺激引起细胞内钙离子浓度升高,与单独PM2.5组有显著差异,p<0.01。对于激活态Jurkat T细胞,各浓度肝素均引起PM2.5作用的细胞内钙离子浓度降低,与对照有显著性差异,p<0.01。不同浓度普鲁卡因与100μg/mL PM2.5共同孵育静息态和激活态细胞3h,各浓度普鲁卡因均降低细胞内钙离子浓度,与对照比较,p<0.05和p<0.01。4.不同浓度PM2.5刺激静息和激活Jurkat T细胞3小时后,以100μg/mL PM2.5刺激细胞内CAMmRNA表达最低,与生理盐水比较差异显著,p<0.05。CAM蛋白随PM2.5浓度升高逐渐降低,存在明显的剂量反应关系,p<0.05。结论：交通相关PM2.5能引起Jurkat T细胞胞内钙稳态紊乱,细胞内IP3受体和兰诺定受体通道参与了钙内流,抑制了钙调蛋白对钙信号的传递。