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目的:高血压(hypertension,HT)是危害人类健康的心血管常见病、多发病,也是一系列心脑血管疾病(如中风、冠心病、糖尿病)的主要危险因素。深入理解高血压发生、发展中的分子机制,对于预防、治疗高血压有重要意义。高血压主要表现为动脉血管张力增加,阻力动脉的张力持续增加是高血压的基本病理特征,而血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)离子通道的活动是血管张力调节的主要因素,在高血压中的变化值得探讨。研究发现,大电导钙激活钾通道(large conduction calcium—activated potassium channels,BKCa)是血管平滑肌分布最丰富、单通道电导最大(100~300pS)的钾离子通道,在血管张力调节中起负反馈调节作用,它的功能或密度的改变可能是高血压的发病机制之一。AngⅡ(angiotensinⅡ)作为一种内源性的缩血管活性物质,通过血管紧张素1型受体(angiotensin receptor1,AT1R)发挥其缩血管的作用。然而,近年来的研究发现,AngⅡ还可以作用于血管紧张素2型受体(angiotensin receptor2,AT2R)舒张特定的血管,其舒张血管的机制正是通过激活BKCa发挥作用的,因此,探讨高血压发病的离子通道机制中AT1R和AT2R的变化以及由此引起的BKca的变化是需要研究的。本课题采用实时荧光定量PCR技术对正常血压和高血压患者肠系膜动脉平滑肌AngⅡ受体基因表达进行对比研究,为进一步探讨原发性高血压发生发展过程中可能的离子通道功能变化,为高血压发病机制的阐明提供更多的实验依据。
方法:①24例接受腹部手术的患者分为两组:原发性高血压(HT组)15例(其中未服抗高血压药的3例,服抗高血压药的12例)、正常血压(NT组)9例,取其切除的肠系膜动脉作为研究对象;②提取肠系膜动脉总RNA,通过逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)构建标准品和标准曲线;③以GAPDH为内参照基因,采用SYBR GreenⅠ法实时荧光定量PCR技术检测高血压患者和正常血压患者肠系膜动脉平滑肌AngⅡ受体基因mRNA水平;
结果:①总RNA质量:提取的总RNA通过紫外分光光度仪测量,A260/A280在1.80—2.10之间,A260/A230在1.90—2.20之间,浓度大于100ng/ul,通过1%琼脂糖凝胶电泳得出,28S带和18S带明显,灰度比大于1,5S带不明显,无拖尾;②标准曲线和熔解曲线:标准曲线线性关系良好,相关系数R2>0.99,AT1R基因的标准曲线为y=—0.29x+9.22,R2=0.995; AT2R基因的标准曲线为y=—0.30x+7.76,R2=0.997; GAPDH基因的标准曲线为y=—0.27x+5.45,R2=0.996。熔解曲线呈明显单峰状,退火温度与预测值基本一致;③AT1R基因NT组mRNA表达的Ct值为4.1727±0.6084,HT未服药组及服药组的mRNA表达的Ct值分别为4.4513±0.5676,4.8074±0.8598,AT1R的mRNA原始拷贝数在NT组和HT组的差异无统计学意义。AT2R基因在NT组mRNA表达的Ct值为7.686±0.6195,HT未服药组及服药组的mRNA表达的Ct值分别为9.104±0.4240,7.6203±0.5548,AT2R的mRNA原始拷贝数在HT未服药组为NT组的0.3926倍,服药组为NT组的1.0567倍,AT2R在NT组和HT未服药组的差异有统计学意义(P<0.05);在NT组和HT服药组的差异无统计学意义。
结论:与正常组患者相比,高血压患者AT1R基因mRNA水平无变化,高血压未服药组患者AT2R基因mRNA水平下调,服药组高血压患者AT2R基因mRNA水平无变化。AT2R基因mRNA水平下调是高血压患者血管张力变化的分子基础之一。