论文部分内容阅读
目的：1.建立大鼠脊髓损伤模型。2.研究大鼠脊髓损伤后脊髓组织细胞自噬与凋亡表达变化的情况及其表达的时程变化。3.研究高压氧治疗对大鼠脊髓损伤后脊髓组织细胞自噬与凋亡的影响。方法：整个实验共使用54只Sprague-Dawaley大鼠，体重250±30g，随机分为假手术组（n=6）、脊髓损伤组(n=24）、高压氧治疗组(n=24）。脊髓损伤组和高压氧治疗组又随机分为伤后6h、1d、3d、7d组，每组6只。假手术组，只予T9椎板切除术，不打击显露的脊髓。脊髓损伤组和高压氧治疗组，大鼠的T9行椎板切除术，然后采用改良Allen打击器打击显露的脊髓。高压氧治疗组伤后给予高压氧治疗，1次/d，每次100min，连续治疗7d。采用BBB评分法评价大鼠运动功能变化情况。按照上述时间点处死大鼠后，用透射电镜观察大鼠脊髓组织细胞自噬，用Western blot法检测自噬相关蛋白：微管相关蛋白1轻链3（Microtubule associated protein1lightchain3，LC3）和凋亡相关蛋白：天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3（Cysteine-containingaspartate-specific proteases3, Caspase-3）。结果：1.与脊髓损伤组相比较，高压氧治疗组在BBB评分上显著升高，并且在7d时间点上，其差异有统计学意义（P<0.05）。2.在透射电镜观察下，假手术组大鼠脊髓组织神经元细胞核膜完整，胞质中线粒体形态分布及数目正常，未发现自噬小体，溶酶体数目也未见增多；脊髓损伤组损伤区可以看见线粒体肿胀明显、空泡化，溶酶体数量增多，细胞核形不规则，可以发现自噬小体；高压氧治疗组可见脊髓组织神经元细胞肿胀，线粒体略肿胀，核形规则，核内染色质欠均匀，游离核糖体及溶酶体数目未见明显增多。3.脊髓损伤组和高压氧治疗组脊髓组织中LC3和Caspase-3的表达在伤后6h上升，伤后3d表达最强，伤后7d表达有所下降；脊髓损伤组和高压氧治疗组中LC3和Caspase-3的表达均较假手术组明显升高，各时间点差异均有统计学意义（P<0.05）；在同一时间点，高压氧治疗组较脊髓损伤组LC3和Caspase-3的表达明显减少，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：1.脊髓损伤后，自噬和凋亡在脊髓组织神经元中表达增强，自噬和凋亡在脊髓损伤后脊髓组织神经元死亡过程中起到作用。2.自噬和凋亡在受损脊髓组织中的表达有相同的时程变化。3.高压氧可以降低大鼠脊髓损伤后自噬和凋亡的表达，可能是治疗脊髓损伤的机制之一。