背景虫媒病毒是在蚊虫、白蛉等吸血昆虫体内繁殖,通过叮咬将病毒传播给人畜的一类病毒。1992年在国际虫媒病毒中心注册的535种虫媒病毒中有128种可使人畜患病,严重可引起死亡。目前世界各地已发生多起严重虫媒病毒病,如登革热、寨卡病毒病等。因此虫媒病毒及其相关疾病是国际关注的公共卫生问题。白蛉病毒属病毒(Genus Phlebovirus)属于布尼亚病毒目(Order Bunyavirales)Phenuiviridae科(Family Phenuiviridae),大多为蚊虫或白蛉传播病毒,包括裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)、那不勒斯病毒(Sandfly fever Naples virus,SFNV)等,可引起发热或脑炎等。目前白蛉传播病毒及其引起的疾病主要分布在地中海地区国家。在亚洲东部地区未见白蛉传白蛉病毒属病毒(sandfly-borne Phlebovirus)及其感染的报道。自20世纪80年代以来开展的虫媒病毒调查显示,在中国采集的100余万份吸血昆虫标本中分离到7科13属29种病毒,虽然对白蛉标本进行过病毒分离或者白蛉传播病毒基因检测,均未获得阳性结果。2011年中国首次报道由蜱传播可引起发热、出血等症状的白蛉病毒属新病毒——发热伴血小板综合征病毒(Severe fever with thrombocytopenia syndrome virus,SFTSV)。2018年在新疆采集的纳氏矩头蜱(Dermacentor nuttalli ticks)标本分离到古尔图病毒(Guertu virus,GTV)。以上两种病毒均属于蜱传白蛉病毒属病毒。山西省(北纬34°34′-40°44′,东经110°14′-114°33′)位于我国中部,地形复杂、温度适宜,促成当地媒介昆虫种类的多样性,除蚊虫外,白蛉是山西省重要的吸血昆虫媒介。本研究对中国中部地区的山西省进行虫媒病毒调查研究,成功从自然界采集白蛉标本中分离到白蛉病毒属病毒,命名为武乡病毒,这是中国首次从白蛉标本分离到白蛉病毒属病毒,提示该病毒不仅存在于地中海地区,并已在中国出现。目的为了解虫媒病毒传播媒介与虫媒病毒疾病的多样性和分布,在山西省采集各种吸血昆虫分离病毒,不仅有利于我国虫媒病毒及相关疾病的防控,而且对亚洲乃至世界各国的公共卫生都具有重要意义。方法2018年6月,在山西省武乡县和阳泉市的动物饲养圈(鸡圈、羊圈等)蚊虫孳生环境采集吸血昆虫标本。在冰浴下进行形态学分类,按采集环境和种类等信息编号登记,立即放入液氮中保存并转移至实验室鉴定。标本研磨、离心,取上清液平行接种BHK-21细胞(金黄色地鼠肾细胞)和C6/36细胞(白纹伊蚊卵细胞)进行病毒分离及病毒基因检测。细胞病变(CPE)时收取病毒液使用分子生物学方法对阳性分离物进行分子生物学鉴定,使用生物学软件对病毒基因组核苷酸序列进行序列同源性分析及分子遗传学分析。通过动物实验和血清学实验进行新分离病毒与人和动物的关系研究。结果1.武乡县虫媒病毒的分离与鉴定2018年6月在山西省武乡县共采集到吸血昆虫4069只,其中白蛉3819只(雌性3792只、雄性27只),蚊虫250只,包括按蚊、阿蚊、伊蚊。本研究对吸血昆虫进行病毒分离与鉴定,首次在山西省武乡县自然界采集的白蛉标本中分离到一种新病毒(17株),该病毒可引起哺乳动物细胞(BHK-21)病变和新生乳鼠发病和死亡;病毒可在BHK-21细胞形成空斑,病毒滴度为108.09pfu/m L。病毒为基因组有三个基因节段的RNA病毒,核苷酸和氨基酸序列同源性分析和分子遗传进化分析结果均表明新分离到的病毒株属于白蛉病毒属新成员,命名为武乡病毒,其代表株为SXWX1813-2病毒。进一步分析表明,武乡病毒与Toros和Corfou病毒亲缘关系最近。另外,血清流行病学研究结果表明当地健康居民血清标本中存在武乡病毒中和抗体阳性。2.阳泉市虫媒病毒的分离与鉴定2018年6月在山西省阳泉市共采集吸血昆虫标本4070只,其中主要为白蛉,白蛉标本3996只,雌性白蛉3904只,雄性白蛉92只,蚊虫标本74只。本研究对在山西省阳泉市采集的吸血昆虫进行病毒分离与鉴定,在白蛉标本中分离到10株病毒(代表株:SXYQ1860),该病毒可引起哺乳动物细胞(BHK-21)病变和新生乳鼠发病和死亡;病毒可在BHK-21细胞形成空斑。核苷酸和氨基酸序列同源性分析和分子遗传进化分析结果均表明新分离病毒株与武乡病毒同源性很高,且与武乡病毒位于一个分支,说明阳泉白蛉标本中分离的10株病毒为武乡病毒,与Toros和Corfou病毒亲缘关系最近。另外,血清流行病学研究结果表明当地健康居民和鸡血清标本中存在武乡病毒Ig M抗体阳性。结论本研究在中国山西省自然界采集的白蛉标本中分离到白蛉病毒属病毒,提示:(1)在白蛉标本分离的武乡病毒为白蛉病毒属的新病毒,为白蛉病毒属病毒生物学表型和分子遗传学研究提供了新的病毒资源;(2)这是首次在我国自然界采集的白蛉标本中发现白蛉病毒属病毒;(3)在山西省武乡和阳泉两地均分离到白蛉传播的武乡病毒,提示武乡病毒在山西省以至山西省以外地区具有广泛分布特征;(4)山西省以外地区是否存在白蛉传播病毒值得开展调查研究;(5)为解释山西省夏秋季节不明原因发热等提供了新的病原学依据。本研究提示白蛉传播病毒在中国出现,在人类和动物血清标本检测到该病毒抗体提示该病毒可感染人和动物。因此,加强我国白蛉传播病毒在人类和动物引起疾病的检测与监测,对于中国乃至东亚地区白蛉传播病毒引起疾病的预防控制等具有重要公共卫生意义。本研究的局限性(1)仅进行一次吸血昆虫标本采集,研究病毒是否长期存在需开展连续调查;(2)未开展白蛉病毒与当地发热或脑炎等疾病关系的研究;(3)阳性批白蛉物种的分子生物学鉴定为中华白蛉,未鉴定其它批次;(4)白蛉传播病毒的宿主动物种类调查研究。