论文部分内容阅读
第一部分miRNA-197在口腔鳞癌组织中的表达目的:采用实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,q RT-PCR)技术检测miRNA-197在口腔鳞癌组织与正常口腔粘膜组织中的表达量,分析探讨miRNA-197与口腔鳞癌发生、发展及淋巴结转移的关系。方法:1采用q RT-PCR技术检测miRNA-197在口腔鳞癌及正常口腔粘膜组织中的表达水平,其中男性患者22例,女性患者14例,年龄在40-76岁,中位数年龄65岁。伴有颈部淋巴结转移患者16例,设置为淋巴结转移组;未发生颈部淋巴结转移患者20例,设置为非淋巴结转移组。2统计学分析采用SPSS21.0统计软件,应用独立样本配对t检验与两组独立样本比较的t检验,对比分析各组实验数据之间的差异,取P<0.05,认为差异有统计学意义。结果:1 miRNA-197在口腔鳞癌组织和正常口腔黏膜组织中的表达量分别为14.06±0.33、13.13±0.38,miRNA-197在口腔鳞癌组织中的表达量高于正常口腔粘膜组织,差异有统计学意义(P<0.05)。2 miRNA-197在淋巴结转移组和非淋巴结转移组口腔鳞癌组织中的表达量分别为15.30±1.21、13.07±1.94,miRNA-197在淋巴结转移组中的表达量高于非淋巴结转移组,差异有统计学意义(P<0.05)。小结:miRNA-197在口腔鳞癌组织中的表达高于正常口腔粘膜组织,其表达量与颈淋巴结转移呈正相关,推测miRNA-197在口腔鳞癌中可能起促癌基因的作用,并参与了口腔鳞癌的发生、发展及转移过程。第二部分miRNA-197对口腔鳞癌细胞株CAL-27功能的影响目的:体外细胞模型研究miRNA-197对口腔鳞癌细胞株CAL-27增殖、迁移功能的影响,为探讨miRNA-197在口腔鳞癌发生发展过程中的分子机制奠定一定的理论基础。方法:1选用口腔鳞癌CAL-27细胞株进行复苏、培养、传代。2将合成的miRNA-197抑制物与阴性对照物(inhibitor/NC)转染至CAL-27中设置为实验组与阴性对照组;同时设置未做任何处理的空白对照组。3 MTS比色分析法对比检测0h、24h、48h、72h、96h时段的OD值,绘制细胞生长曲线。4细胞克隆实验对比检测实验组、阴性对照组与空白对照组的CAL-27细胞集落形成情况。5 Transwell细胞迁移实验对比检测实验组、阴性对照组与空白对照组的CAL-27细胞迁移能力。6应用SPSS21.0软件对数据进行统计分析,数据以均数±标准差表示。两组间配对样本选择t检验,两组间独立样本采用Mann-Whitney检验。结果:1转染24h后,口腔鳞癌细胞实验组、阴性对照组与空白对照组中mi RNA-197的表达量分别为12.65±0.24、14.85±0.07、14.51±0.08,差异有统计学意义(P﹤0.05)。2在MTS实验48h后,实验组、阴性对照组及空白对照组的OD值分别为0.44±0.04、0.56±0.03、0.58±0.01,差异有统计学意义(P﹤0.05)。3在细胞克隆形成实验中,实验组、阴性对照组及空白对照组的细胞克隆形成率分别为3.97±0.26%、7.50±0.42%和7.78±0.21%,差异有统计学意义(P﹤0.05)。4在细胞迁移实验中,实验组、阴性对照组及空白对照组的迁移细胞数分别为115.33±3.68、163.67±4.01和167.33±5.3,差异有统计学意义(P﹤0.05)。小结:下调miRNA-197在口腔鳞癌细胞CAL-27中的表达可抑制其增殖和迁移功能,推测miRNA-197在口腔鳞癌的增殖和迁移过程中可能作为促癌基因发挥作用,有望成为口腔鳞癌治疗的新的潜在靶点。结论:口腔鳞癌组织中的miRNA-197的表达普遍上调,尤其在淋巴结转移组表达上调现象尤为明显,并且调控其表达量能够影响口腔鳞癌细胞CAl-27增殖、迁移等生物学行为。推测miRNA-197可能作为促癌基因在口腔鳞癌发生、发展和迁移过程中发挥作用,并可能成为口腔鳞癌诊断、治疗新的生物学标志物。