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在我国,随着人们生活水平的极大提高,酒精类饮品的消耗量不断递增,酒精性肝病(ALD)的发生率也在逐年攀升。近年来,酒精性肝病受到越来越多的关注,酒精性肝病的发病机制也被广泛研究,但酒精性肝病的治疗手段并没有突破性进展,精确的发病机制有待进一步阐明。丹皮酚是从毛茛科植物牡丹的干燥根皮中提取出来的一种有效成分,学名是2’-羟基-4’-甲氧基苯乙酮,文献报道其具有镇痛、抗炎、解热和抑制变态反应等多种药理活性。本论文分别以HepG2细胞和C57BL/6小鼠为体外和体内模型探究丹皮酚对急性酒精性肝损伤的保护作用及初步分子机制。本文研究内容与结果如下:1.丹皮酚预处理对酒精诱导的HepG2细胞损伤具有保护作用。MTT试验结果显示300 mM的酒精没有明显降低HepG2细胞的生存率,但后续实验结果表明,300 mM的酒精使HepG2细胞内的ROS和炎症因子水平明显升高,这说明300 mM的酒精虽然不能大量杀死HepG2细胞,但已经破坏了细胞内的氧化还原平衡并引起炎症反应。丹皮酚(2、6、18 μM)预处理浓度依赖性抑制酒精引起的HepG2细胞内的ROS和炎症因子水平的提高。细胞形态学实验也表明丹皮酚预处理对酒精诱导的HepG2细胞损伤具有保护作用。2.丹皮酚通过SIRT1/Nrf2/NF-κB信号通路保护酒精对HepG2细胞的损伤。将HepG2细胞用含有丹皮酚(2、6、18μM)或用生理盐水代替丹皮酚作为空白对照的培养基孵育24小时,然后再用300mM的酒精处理HepG2细胞24小时。丹皮酚预处理促进Nrf2的核转移并抑制NF-κB的核转移,促进抗氧化蛋白NQO-1和HO-1的表达。SIRT1对Nrf2的核转移过程起重要的调节作用,用丹皮酚与SIRT1的抑制剂NAM共同处理阻断了 SIRT1的表达,并削弱了丹皮酚对HO-1、NQO-1、SIRT1和核Nrf2等蛋白质表达的促进作用。3.血清指标检测结果和组织病理学观察均证实丹皮酚对酒精灌胃损伤C57BL/6小鼠具有保护作用。与空白对照组相比,酒精处理显著升高C57BL/6小鼠血清ALT和AST水平,而丹皮酚预处理组ALT和AST水平更接近空白对照组。丹皮酚预处理显著抑制了酒精引起的血清还原型谷胱甘肽(GSH)的消耗和TNF-α表达的增加。HE染色显示来自空白对照组和丹皮酚单独处理组(没有进行酒精处理)的肝切片具有完整的中央静脉腔和放射性的规则肝索。酒精处理引起明显的水肿,气球样变性和肝索紊乱,部分肝细胞坏死。我们同时发现,用丹皮酚预处理显著抑制酒精引起的肝损伤,酒精+丹皮酚(25mg/kg)组的切片显示水肿和气球样变性的范围明显减少,肝索的紊乱程度显著降低,酒精+丹皮酚(100 mg/kg)组中肝脏切片与空白对照组没有显著差异。4.丹皮酚通过调节Nrf2和NF-κB的核转移抑制酒精诱导的C57BL/6小鼠肝损伤。Westem blotting结果显示,与对照组相比,丹皮酚处理显著促进SIRT1表达,促进Nrf2核转移,并减少NF-κBp65核转移。对于SIRT1,与对照组相比,酒精处理组SIRT1的表达没有明显变化,但丹皮酚处理组的SIRT1表达水平高于相应的丹皮酚+酒精处理组。与对照组相比,酒精处理组细胞质Nrf2表达增加,丹皮酚+酒精组减少细胞质Nrf2的表达,并增加核Nrf2的表达。与对照组NF-κB相比,酒精处理组核NF-κB表达增加,丹皮酚+酒精组核NF-κB表达减少,细胞质NF-κB表达增加。综上所述,丹皮酚预处理对急性酒精性肝损伤具有保护作用。通过促进SIRT1、核Nrf2、NQO-1和HO-1等蛋白的表达抵抗酒精引起的氧化应激,通过抑制核NF-κB的表达,减少酒精引起的TNF-α、IL-6和IL-1β等炎症因子释放,避免过度炎症反应。