目的:构建I-Sce I-HR/NHEJ系统并应用该系统制备DNA双链断裂损伤修复的Hela细胞模型,为进一步探讨DNA双链断裂修复的分子机制奠定基础。方法:通过分子克隆技术构建携带I-Sce I内切酶识别序列的pc DNA3.1(+)-e GFP-HR/NHEJ-reporter真核表达载体,并将其转染入宫颈癌细胞株Hela,经G418筛选出稳定转染株,随后瞬时转染表达归位内切酶I-Sce I的质粒p Ds Red-Monomer-C1-I-Sce I,48小时后荧光显微镜下观察同源重组修复(HR)及非同源末端连接(NHEJ)的情况,瞬时转染后的Hela细胞行PCR及凝胶电泳,对HR、NHEJ等情况作进一步验证。结果:酶切鉴定和测序证实真核表达载体e GFP-HR/NHEJ-reporter构建成功,将其转染入Hela细胞中后,PCR显示e GFP表达。在瞬时转染表达归位内切酶I-Sce I的质粒p Ds Red-Monomer-C1-I-Sce I后荧光显微镜下观察显示同时出现红色与绿色荧光,提示有同源重组修复。瞬时转染后的细胞行PCR及凝胶电泳结果提示有非同源末端连接。结论:DSB细胞修复模型构建成功,I-Sce I-HR/NHEJ系统能够成功地诱导Hela细胞株产生DSB,并可通过同源重组和非同源末端连接进行修复。为进一步探讨DNA双链断裂修复的分子基础提供了有效的研究工具。