RNF5促进肝细胞癌增殖及侵袭转移的研究

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实验第一部分RNF5在HCC中高表达与病人恶性预后密切相关目的:探讨RNF5在肝细胞癌中的表达及其临床病理意义和对预后的影响。方法:利用RT-PCR和免疫组化技术分别检测肝癌病人癌和相应癌旁组织中RNF5在m RNA水平(70对)和蛋白水平(67对)的表达,分析RNF5在癌中的表达与患者临床病理特征的相关性及对预后的影响。结果:在m RNA水平癌组织RNF5表达高于癌旁组织(p<0.001);蛋白水平RNF5在癌组织内的表达也明显高于癌旁组织(p=0.002),且RNF5在癌内表达水平与肝癌患者的肿瘤大小(p=0.030)、卫星灶(p=0.017)及AFP(p=0.030)密切相关。Kaplan–Meier模型分析显示肝癌组织中RNF5蛋白表达高生存短,Cox回归模型分析表明RNF5高表达是肝癌患者预后的独立危险因素(p=0.021)。结论:RNF5在肝癌中的异常高表达,与肝癌患者增殖及转移指标相关,其高表给患者带来更差的预后。故RNF5可作为一个肝癌预后评价的重要指标,有望成为肝癌全身治疗的新靶点。实验第二部分RNF5促进肝细胞增殖及转移目的:研究RNF5对肝癌细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨可能的作用机制;探讨RNF5对HBV相关肝炎、肝纤维化的作用。方法:构建稳定过表达和敲低RNF5的肝癌细胞系,进行CCK8、克隆形成、凋亡实验、Transwell小室实验,研究RNF5对肝癌细胞增殖及侵袭转移能力的影响;利用质谱及CO-IP探讨RNF5的作用机制;通过构建动物模型、临床标本研究RNF5在HBV相关肝炎、肝纤维化过程中的作用。结果:RNF5过表达促进SMMC-7721及SK细胞的增殖及侵袭转移能力,敲低内源性RNF5削弱PLC,Huh7细胞增殖及侵袭转移能力。体内实验进一步证实过表达RNF5后肝癌细胞在裸鼠皮下成瘤的能力增强,反之则减弱。感染人HBV后树鼩肝脏组织RNF5轻度表达,阳性率为72%,未感染HBV的肝组织中RNF5少量表达,阳性率仅为28%,两组阳性率差别具有统计学意义(p<0.001)。在四氯化碳致肝硬化动物模型及肝纤维化患者肝穿标本中未检出到RNF5的表达。细胞实验表明RNF5可能通过稳定ATP1A1发挥促癌功能。结论:实验证实RNF5促进肝癌细胞增殖及转移,抑制RNF5的表达可以达到抑制肝癌增殖及侵袭转移,故RNF5可成为肝细胞癌的治疗的新靶点。
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