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近年来,有关马兜铃酸肾病的报道逐渐增多,成为肾科医生面临的一个新的病种,但是其发病机制尚不明确,也无特效的治疗方法。因此,探讨马兜铃酸肾病的发病机制,寻找有效的预防和治疗措施成为肾脏病领域研究的热点。目前关于马兜铃酸肾病发病机制的研究较多,但是多集中于马兜铃酸对肾小管上皮细胞的影响等方面,而马兜铃酸对肾血管尤其是肾间质微血管的影响却鲜有研究报道。为此,我们用关木通成功复制了大鼠慢性马兜铃酸肾病模型,通过该模型研究慢性马兜铃酸肾病大鼠。肾缺血损伤机制及温阳活血方对其干预作用,对可能参与该过程的细胞因子Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、BMP-7、Caspase-3和CD34进行了探讨,以揭示肾缺血损伤机制在慢性马兜铃酸肾病进展中的作用,同时探讨温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病大鼠。肾脏保护作用机制,为临床应用该方提供理论和实验依据。
[目的]：
1 探讨慢性马兜铃酸肾病大鼠肾缺血损伤机制,分析肾微血管改变与肾小管损伤、凋亡及间质纤维化的可能关系。
2 观察Ang-1、Ang-2、Tie-2、VEGF、BMP-7、Caspase-3、CD34在大鼠肾组织中的表达,明确其在慢性马兜铃酸肾病大鼠肾缺血损伤中的作用。
3 探讨温阳活血方防治慢性马兜铃酸肾病的可能机制,为临床应用该方提供理论和实验依据。
[方法]：
健康雄性SD大鼠48只,适应性饲养一周后,根据体重按随机数字表分为5组,正常组8只,其余每组各10只。(1)正常对照组：用生理盐水灌胃(10ml·kg-1·d-1)(2)模型组：按关木通水煎液10ml·kg-1·d-1(相当于关木通40g·kg-1·d-1,马兜铃酸A2.6mg·kg-1·d-1)给大鼠灌胃(3)温阳活血方组(中药组)：在模型组基础上,再予温阳活血方30g·kg-1·d-1灌胃(4)科素亚组(西药组)：在模型组基础上,再予科素亚33.3mg·kg-1·d-1灌胃(5)(温阳活血方+科素亚)组(中西药结合组)：在模型组基础上,再予(温阳活血方30g·kg-1·d-1+科素亚33.3mg·kg-1·d-1)灌胃。21周末,收集大鼠尿液测定24小时尿蛋白、NAG、β2-MG;腹主动脉取血测定Scr、BUN、RBC、Hb;光镜和电镜观察。肾脏病理；免疫组化检测肾组织Caspase-3和BMP-7的表达；采用CD34免疫组化染色来反映肾组织微血管的损伤情况；实时PER检测肾组织中Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGFmRNA的表达。
[结果]：
1 大鼠生化指标结果：与正常对照组比较,模型组大鼠24小时尿蛋白、NAG、β2-MG、血Scr、BUN均明显升高(P<0.05),而血Hb、RBC均明显下降(P<0.01);与模型组比较,各治疗组大鼠24小时尿蛋白、NAG、β2-MG、血Scr、BUN均明显下降(P<0.05),而血RBC、Hb均明显升高(P<0.05)。
2 大鼠肾脏病理结果：给药21周后,从光镜和电镜可以看出,正常对照组肾组织结构基本正常；模型组肾小球呈缺血性基底膜皱缩,肾小管上皮细胞变性,坏死脱落,基底膜裸露,部分肾小管萎缩或消失,肾间质病变区有大量束状胶原纤维；各治疗组可见。肾小球基底膜缺血性皱缩程度、肾小管上皮细胞变性、坏死及间质纤维化程度均减轻。
3 大鼠肾组织免疫组化染色结果：①与正常对照组比较,模型组肾组织Caspase-3表达增多(P<0.05),而BMP-7表达减少(P<0.01);与模型组相比较,各治疗组肾组织Caspase-3表达减少(P<0.05),而BMP-7表达增多(P<0.05)。②CD34在正常对照组肾小管间质中大量表达,而模型组表达减少,与正常组比较有统计学意义(P<0.01);予温阳活血方和科素亚干预治疗后,CD34在肾小管间质中的表达较模型组明显增加(P<0.05),各治疗组之间没有统计学意义(P>0.05)。提示：与正常对照组比较,模型组肾间质微血管明显减少,各治疗组与模型组相比微血管损伤较轻。
4 大鼠肾皮质Real-time PCR检测结果：模型组与正常组对照组比较,肾组织Ang-1、Tie-2和VEGFmRNA的表达下调(P<0.05),而Ang-2mRNA 的表达上调(P<0.01);与模型组大鼠相比较,各治疗组大鼠肾组织Ang-1、Tie-2和VEGFmRNA的表达上调(P<0.05),Ang-2mRNA的表达下调(中药与与科素亚联合)(P<0.01)。 5 CD34与Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGFmRNA间的相关性分析结果：在慢性马兜铃酸肾病模型中肾组织CD34的表达量与Ang-1、Tie-2和VEGFmRNA的表达量呈显著正相关(r=0.796,r=0.8,r=0.817,P<0.01),与Ang-2mRNA表达量呈显著负相关(r=-0.653,P<0.01)。因此,提示我们慢性马兜铃酸肾病肾组织微血管的损伤丢失和Ang-1、Ang-2、Tie-2和VEGF密切相关。
[结论]：
1 关木通等含马兜铃酸的中草药可以引起肾损害,导致肾功能减退、贫血及尿蛋白、NAG和β2-MG的排泄水平升高。
2 慢性马兜铃酸肾病存在肾微血管的损伤丢失以及肾小管的坏死凋亡,这可能与肾组织Ang-1、BMP-7、Tie-2、VEGF表达减少及Caspase-3和Ang-2表达升高有关,上述因子最终共同启动和促进了纤维化进程。
3 温阳活血方对慢性马兜铃酸肾病具有肾保护作用,能够改善肾功能,减轻贫血,减少尿蛋白、尿NAG和β2-MG的排泄,能够减轻马兜铃酸造成的肾组织形态学改变,其部分保护机制可能与其减少。肾组织Caspase-3、Ang-2mRNA的表达以及升高BMP-7、Ang-1mRNA、Tie-2mRNA、VEGFmRNA的表达有关。
4 科素亚对慢性马兜铃酸肾病也具有。肾保护作用,能够减少尿素氮及尿蛋白排泄,能够减轻肾脏病理损伤,与温阳活血方相比没有统计学差异。