氯代奎宁对A549细胞的增殖抑制作用研究

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氯代奎宁对A549细胞的增殖抑制作用研究 目的: 研究氯代奎宁(CQ)对人类肺癌A549细胞的增殖抑制作用及其作用机制。探讨磷脂酰胆碱特异性磷脂酶C(PC-PLC)在CQ诱导的空泡化、凋亡与坏死过程中的作用。 研究方法: 以不同浓度的氯代奎宁(CQ)(0.25 μmol/L~128 μmol/L)作用于体外培养的A549细胞0~72小时。 1.利用相差显微镜观察A549细胞的形态变化 2.MTT法检测细胞存活率 3.中性红吸收法检测溶酶体空泡化程度 4.对活细胞进行吖啶橙染色,在荧光显微镜下观察细胞核变化,以检测细胞凋亡。 5.乳酸脱氢酶(LDH)测试法检测细胞是否出现坏死 6.用PC-PLC的特异性抑制剂D609研究PC-PLC的作用 结果: 1.在低浓度(0.25μmol/L~32μmol/L)时,CQ能够抑制A549细胞的增殖,同时,它还诱导细胞空泡化,使酸性区室总体积(VAC)增大。 2.在高浓度(64μmol/L-128μmol/L)时,在24小时,CQ诱导A549细胞凋亡,而空泡化程度比32μmol/L时减弱了。 3.乳酸脱氢酶测试结果表明用CQ(32或64 μmol/L)处理A549细胞72小时或者CQ(128μmol/L)48小时,A549细胞发生坏死。 4.D609(50μmol/L)能够抑制CQ(32μmol/L)对A549细胞的增殖抑制作用和空泡化作用,但不能影响CQ(128μmol/L)对A549细胞的增殖抑制作用和空泡化作用。 结论: 1.氯代奎宁(CQ)能显著抑制A549细胞的增殖。 2.在低浓度(0.25μmol/L~32μmol/L)下,CQ通过增大溶酶体体积抑
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