灵芝中几丁质的分离表征及几丁质—葡聚糖复合物水凝胶制备

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灵芝(Ganoderma lucidum)含有多糖、蛋白、三萜等多种活性成分,具有多种药理作用。在灵芝加工过程中,可溶性活性成分被提取后剩余的细胞壁残渣常作为废弃物被丢弃,未得到有效利用。该残渣通常含有几丁质、葡聚糖等天然高分子多糖,在食品、生物医药等领域具有很高的应用价值。本课题旨在对灵芝子实体预处理后残渣中的几丁质提取物进行分离表征,进一步探究其作为止血水凝胶的应用,为灵芝加工废弃物高值化利用提供思路。首先,分析了灵芝子实体的主要成分,并对灵芝子实体的预处理条件进行了探究。结果表明,灵芝子实体中几丁质含量为3.52%。通过比较灵芝子实体可溶性成分的溶出效果确定其预处理条件为:沸水超声提取30 min,且重复提取3次,并加入1.5 M NaOH 于 85℃ 反应 5 h,可得到碱不溶物 AIM(Alkali Insoluble Material)。其次,采用化学法结合酶法从预处理后AIM中分离几丁质,比较了不同方法得到的几丁质提取物GLCE(Ganodermalucidum Chitin Extract)的差异。AIM经纤维素酶水解后得到GLCE-1,先酶解后化学法处理得到GLCE-2、GLCE-3,先化学法后酶解处理得到GLCE-4。结果表明:各提取物在杂质含量、微观结构及性能上有显著差异,各提取物中氨基葡萄糖含量为3.85%-5.05%,木质素含量为0.80%-8.07%,灰分含量为0.29%-1.22%,葡萄糖含量为70.60%-76.69%。其中GLCE-4氨基葡萄糖含量为3.85%,木质素含量为0.80%,灰分含量为0.29%,杂质含量更少。葡萄糖含量为76.69%,表明该提取物中主要成分为几丁质和葡聚糖。同时,形貌分析表明各提取物在表观及微观结构上有明显区别,扫描电镜显示提取物呈现出结构紧密的纤维网状结构,其中GLCE-4纤维结构表面无杂质附着,展示了清晰的束状纤维网络,而其它组有不同程度的杂质包裹。接着,采用重量法对其吸水性能进行了测定,其中GLCE-4吸水率高达 1721.7%。再次,以离子液体([AMIM]Cl)为溶剂将提取的灵芝几丁质-葡聚糖复合物(GLCE-4)溶解再生,制备了不同GLCE-4含量的灵芝几丁质-葡聚糖复合物水凝胶(Ganoderma lucidum Chitin-Glucan Complex Hydrogel,GLCGCH),并对其微观结构、流变性能及溶胀性能等进行了分析表征。结果表明:GLCE-4经离子液体溶解制备的水凝胶红外光谱图中未产生新的吸收峰,表明该过程未发生衍生化反应。GLCGCH均具有相互连接的多孔结构,孔隙率高,其平衡溶胀率为1181.0%-1891.0%,且随着GLCE-4含量的增加,溶胀率呈下降趋势,而机械强度随之增加。最后,初步评价了 GLCGCH作为止血敷料的应用效果。通过溶血率及凝血指数的测定评价了 GLCGCH的血液相容性和体外凝血能力。结果表明:该水凝胶敷料的溶血率为0.99%-1.44%,低于医用材料标准规定的5.0%。其凝血指数为35.3%-41.9%,与商品明胶海绵相当(32.6%,p>0.1),说明该水凝胶具有良好的血液相容性和体外凝血能力,具备作为止血材料的应用潜力。综上,灵芝子实体预处理后经不同方法分离的几丁质提取物在成分、结构及性能上有明显差异,表明先化学法后酶法有利于产物的分离,所得提取物的主要成分为几丁质和葡聚糖,两者相互交联形成了稳定的纤维网络结构并具有优异的吸水能力,形成的水凝胶具有止血活性。上述研究为灵芝子实体的高值利用提供了新思路。
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