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猪伪狂犬病(Porcine pseudorabies,PR),也称奥杰斯基氏病(Aujeszky’s disease,AD),是由猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)引起的急性传染病,感染猪的临床特点主要是40℃以上的体温升高症状、生殖障碍和急性出血脑炎,新生仔猪主要表现为PRV的嗜神经性引起的神经症状。本病可以感染多种动物,其中猪最敏感(包括家猪及野猪),发病也最严重,具有高度致死性。实验动物中以家兔和小鼠最易感。PRV的流行为全球养猪业带来了不可估量的农业损失。PRV目前为止在全世界范围内均无特效药物治疗,主要依靠疫苗接种进行预防。国内猪群伪狂犬感染率较高,本研究通过对实验室收集的安徽部分规模化猪场血清、病料,PRV野生型抗体和免疫抗体的ELISA和分子流行病学调查,按照样本来源的不同地域、不同时间、不同生长阶段、不同规模进行多维分析,同时选择PRV的主要基因进行遗传进化分析,以深入了解PRV在安徽境内的流行情况。(1)安徽省部分地区大型养猪场血清PRV gE野生型抗体的ELISA检测与分析本研究通过使用伪狂犬gE抗体间接ELISA试剂盒,对2017-2018年来自合肥、芜湖、蚌埠、安庆等11个地方,来自126个大型猪场的总共4164份不同日龄大小的猪血清进行了 PRV gE抗体监测,其中2017年监测了 1767个样本。2018年共计检测血样2397份。试验结果显示,2017年gE血清抗体阳性率为30.2%,2018年gE血清抗体总阳性率为28.4%,检测猪场共计126个,其中2017年检测猪场55个,血清中PRV gE抗体阳性场38个,场阳性率为69.1%;在2018年,监测了 71个养猪场,并在血清中检测到44个阳性PRV gE抗体的场,场阳性率高达62.0个百分点。根据四季不同,2017年第四季度PRV gE抗体阳性率分别为40.0个百分点和34.3个百分点。第三季度PRV gE抗体阳性率均为最低,分别为25.6个百分点和13.8个百分点。而按照不同生长阶段进行分析发现,2017年gE抗体阳性率最高的为保育猪(36.4%),最低为种公猪(22.2%);2018年gE抗体阳性率最高的是后备母猪(35%),最低的是公猪(19.3%)。总体而言,安徽省猪场PRV gE抗体阳性率呈下降趋势。(2)安徽省部分地区大型养猪场血清PRV免疫gB抗体的ELISA检测与分析本研究通过使用伪狂犬gB抗体间接ELISA试剂盒,对2017-2018年来自合肥、芜湖、蚌埠、阜阳、亳州等11个地方,共计检测血样2734份,检测猪场129个。2017年,共监测了1608份血样,1414份gB抗体阳性,血清阳性率为87.9个百分点,监测了 56个猪场,gB抗体均为阳性,达到了 91.9个百分点,最低为皖南(82%)。在四个季节当中,第二季度gB抗体水平最高,为91.6个百分点,第四季度最低(83.7%),在不同生长阶段猪只中,仔猪gB抗体水平最高(95.7%),最低为怀孕母猪(79.2%)。在2018年,共监测了 1126份血液样本,1088份gB抗体阳性,阳性率为96.6个百分点,监测的73个猪场有71个PRV gB抗体阳性场。血清gB抗体阳性率最高的是皖南地区(98.1%),最低的是中部(95.7%)。在2018年第二季度,血清gB抗体阳性率最高(98.2%)。最低为第四季度(91.3%),各生长阶段中,仔猪gB抗体阳性率最高(98.3%),最低为后备母猪(94.9%)。总体而言,到2018年,监测区域血清PRV gB抗体阳性率增加,但个别区域减少。(3)研究安徽部分猪场疑似样本的PCR鉴定及遗传进化分析。通过PCR检测来自养猪场的117个样品,并对一些阳性样品的基因进行测序。结果显示,2017年PRV送检试验材料的阳性率为29.8%;2018年送检病料PRV阳性率为16.7%。选择了 6份阳性样本进行序列测定,经比对6株安徽地区PRV阳性样本gE基因之间的核苷酸序列的同源性达到98%-100%;有5株的gE基因与河南HNQ4猪同源性高于98.5%,有1株与北京BJ-RD亲缘关系最近,且同源性为99.9%。为研究安徽省PRV分子病原学调查奠定数据基础。综上所述,安徽省PRV的流行趋势正在呈逐年下降趋势,但个别地区PRV防控形势仍相对严峻。本研究为未来安徽地区PRV的深度净化提供了技术支持和数据支撑。