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烟草是我国的重要经济作物,种植面积和总产量居世界第一,也是烟农收入、地方和国家财政收入的重要来源之一。烟草青枯病是烟草的主要病害之一,危害严重,谓之“烟癌”。1880年首次发现于美国,目前,在我国西南烟区普遍发生,在疫区常呈暴发流行,造成毁灭性损失,发病严重时产量损失80%左右。为有效防治烟草青枯病,我们从贵州省青枯病迟发烟地和不发烟地中初步筛选出15株拮抗微生物,通过拮抗能力的鉴定,筛选出拮抗力较强的放线菌1株和真菌2株,并对它们产生的抗菌物质进行了粗提和活性检验。结果表明:(1)经青枯病平板拮抗试验筛选出15个菌株,包括细菌3株,放线菌3株,真菌9株,真菌多属木霉、青霉属。细菌的拮抗效果相对较差,放线菌和真菌较强。指的值得注意的是,从中性紫色土中获得的菌株拮抗能力>黄色石灰土>黄壤,这与贵州烟区青枯病的发生情况相符,即黄壤的发病率最高,其次是黄色石灰土,中性紫色土发病率最低。依据抑菌圈大小,经反复平板拮抗试验,筛选出3株有优良拮抗效应的拮抗菌株,分别是放线菌1株(actinomycete)和2株真菌(fungus)依次命名为A-01,F-01和F-02。(2)通过液体发酵培养A-01,F-01和F-02,在发酵液中均检测到拮抗青枯病菌的抗菌物质,且有较好的抑菌效果。在青枯菌的培养液中加入过滤后的A-01,F-01和F-02发酵液,显著抑制青枯菌的生长。若发酵液加入量相同,抑制青枯菌生长的效果F-02>F01>A-01。(3)液体发酵试验表明,F-02产生的抗菌活性物质在菌株在生长时即产生,随着菌量的增加而增加。发酵24h开始产生抗菌物质,48~120h是产生的高峰期。(4)通过离心、超滤、浓缩等简单的纯化,发现3个菌株分泌抗菌物质活性有显著差异。其中,F-02的活性最强,F-01次之,A-01最低,抗菌活性相差近20倍。(5)热稳定性试验研究表明,F-02所产生的抗菌物质耐高温,温度变化于5~120℃不会显著改变其活性,初步估计该抗菌活性物质非蛋白质类(6)F-02产生的抗菌物活性受pH植影响。在碱性条件下活性降低或失活;在酸性条件下抑菌效果较好,适宜的pH值为4~5。(7)在常温条件下,F-02产生的的抗菌物质的活性随着保存时间的延长而降低,保存21天活性开始下降;保存一个月,活性约下降10%。(8)小尺度的田间预防试验表明,施用F-02发酵液,烟株青枯病的发病率和发病指数显著降低,防治效果达到49.4%。