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失血性休克在临床常见,失血性休克引起的细胞损伤是发生急性肺损伤、肠屏障功能障碍乃至多器官功能障碍综合征等的重要原因,也是发展为难治性休克一个基本机制。失血性休克引起远端器官结构损伤和功能障碍的机制受到关注。目前认为,肠源性毒性物质经肠淋巴途径回流到全身,是失血性休克导致无菌性多器官损伤的一个主要途径。失血性休克后,在肠淋巴液通过胸导管直接流入锁骨下静脉、进入血液循环系统的过程中,血管是第一个暴露于休克肠淋巴液(post hemorrhagic shock mesenteric lymph,PHSML)的部位,PHSML引起的细胞损伤与功能障碍是失血性休克引起血管通透性增高、血管反应性降低、器官损伤的主要原因。众多研究表明,以减少PHSML回流为目标的治疗措施对于防治重症休克具有积极意义。血管内皮细胞损伤是血管高通透性的基础,PHSML回流参与了失血性休克引起血管高通透性的病理过程,但详细的分子机制,还不是非常清楚。为此,本研究应用基因转录组学技术,观察PHSML对人脐静脉血内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)基因转录组的影响,通过差异表达基因的聚类分析(GO)和KEGG通路富集分析,明确PHSML损伤HUVECs的主要信号分子与信号通路,希望能加深对PHSML损伤内皮细胞分子机制的了解,以期针对PHSML为重症失血性休克的防治提供新的思路。应用健康雄性大鼠,常规方法建立失血性休克模型:股动脉放血,维持血压40 mm Hg持续90 min后,液体复苏。液体复苏结束后,行腹部手术,常规方法引流肠淋巴液,为PHSML。另取一组健康雄性大鼠,全身麻醉后,常规方法引流肠淋巴液,为正常肠淋巴液(normal mesenteric lymph,NML)。随后,分别应用生理盐水(Control)、NML、PHSML(终浓度为10%)与HUVECs孵育,3 h后留取HUVECs,提取m RNA,采用新一代测序技术对三组细胞进行测序分析。测序结果显示,Control与NML组HUVECs的转录组几乎没有差异;相对于NML,PHSML作用后HUVECs有多个差异表达基因。进一步应用GO和KEGG分析PHSML与NML的差异表达基因,发现这些差异表达基因主要与凋亡、应激等生物过程相关,主要富集在NOD样受体(nucleotide oligomerization domain-like receptor,NLR)信号通路、核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)信号通路,这三条信号通路以及相关差异表达的基因均与炎症反应有关。为了验证基因转录组学测序技术发现的差异表达基因,应用实时荧光定量PCR检测了BIRC3、NFKBIA、CXCL1、ICAM-1、CCL2、TNFAIP3、JUNB等7个差异表达基因的m RNA表达,结果显示这些基因的RT-PCR结果与RNA-Seq结果一致。鉴于趋化因子CCL2在细胞损伤中的作用,本文观察了CCL2抑制剂对PHSML损伤HUVECs的影响,结果显示,CCL2抑制剂可以显著改善PHSML处理后HUVECs的细胞增殖状态。通过上述研究,初步揭示了PHSML损伤内皮细胞的机制与NLR、NF-κB、TNF信号通路介导的炎症反应有关,抑制CCL2有利于减轻PHSML引起的内皮细胞损伤。研究结果加深了休克肠淋巴液损伤血管内皮细胞分子机制的理解,为防治重症失血性休克提供了新的视角。