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目的: 心肌重塑是指心脏在各种外界因素作用后出现的一系列组织细胞形态学的病理变化,包括心肌细胞肥大、和以间质胶原增生、纤维化为特征的心肌间质胶原重塑。心肌重塑是扩张型心肌病(DCM)慢性心力衰竭的主要病理学基础,是心功能由代偿向失代偿期转变的重要病理过程。在慢性心衰的发病机制中,肾素一血管紧张素一醛固酮系统 (RAAS) 的过度激活是加重心肌损伤、心肌重塑、促进心衰进展的重要因素。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) 是RAAS的主要效应分子,研究发现AngⅡ可促使心肌成纤维细胞(CFs) 增殖,合成分泌胶原等细胞外基质成分,介导间质纤维化,参与心肌重塑。AngⅡ受体(AT)包括AT1和AT2,AT1受体存在于心肌细胞、血管平滑肌细胞、内皮细胞、神经末梢和传导系统, 介导血管收缩、肾脏对水的潴留、醛固酮和血管加压素的释放以及交感神经的激活等反应等所有已知的AngⅡ的心血管作用。AngⅡ通过激活心肌细胞膜AT1受体,激活多种细胞内信息转导过程, 从而促进细胞生长, 引起心肌细胞肥大和间质增生。钙调神经磷酸酶(CaN)是一种受细胞内Ca2+ 及钙调素调节的多功能信号酶,已经证实依赖CaN的信号通路在介导心肌细胞肥大反应性基因的表达、促进心肌肥厚中起着重要作用,但对心脏CFs增殖、胶原合成、心肌胶原重塑信号转导的作用国内外还较少研究,特别是与AT1受体间关系罕有报告,本研究借助经典的阿霉素大鼠DCM心室重塑动物模型,研究CaN信号通路的在心室胶原重塑中的作用,及其与AT1受体间的关系,从分子水平探讨DCM心室重塑的发病机制,为开辟DCM的治疗新的思路提供一定的实验依据。
方法: 将8周龄、清洁级雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠[徐州医学院实验动物中心供应]体重250±10g。 随机分为三组:(1)正常对照组(NC组):生理盐水2ml/kg腹腔注射,每周一次,共8周,8只;(2)单纯模型组(ADM组):盐酸多柔比星(浙江海正药业有限公司生产,批号:H33021980)2mg/kg体重腹腔注射,每周1次,共8周,12只;(3)氯沙坦组(LOS组):盐酸多柔比星2mg/kg体重腹腔注射,每周1次,共8周,12只,氯沙坦(杭州默沙东制药有限公司,批号:50mg H20000371)10mg/kg体重灌胃,于首次阿霉素用后4周开始,1次/日,共4周,末次注射ADM后10天,无菌取出心脏。本实验检测的指标有:(1)所有大鼠称体重(BW)、心脏重量(CW)和左室重量(LVW)计算心重指数(CWI=CW/BW)、左室指数(LVWI=LVW/BW);(2)采用免疫组化法检测心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原表达及比值;(3)采用Western blot法检测AT1受体表达(4)采用活性比色定量法测定心肌组织CaN的活性。
结果:
1. 光镜下心肌病理改变:对照组心肌细胞排列均匀整齐,横纹清楚,细胞大小均一,心肌细胞间隙无变化。模型组心肌细胞肥大、伸长、灶状坏死,肌质变性,核大、深染,间质纤维化、胶原增生,证实阿霉素诱导SD大鼠心肌胶原重塑模型是成功的。氯沙坦组大部分心肌组织呈平行排列,结构清晰,间质有少量疏松结缔组织。
2.心重指数( CWI)和左室指数(LVWI):模型组(2.86±0.05,2.20±0.02)与正常对照组(2.78±0.02,2.18±0.01 )相比,CWI和LVWI均升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,氯沙坦(2.82±0.05,2.19±0.03)治疗组CWI和LVWI均有不同程度下降,差异有统计学意义(P<0.01);氯沙坦治疗组与正常对照组比较,CWI和LVWI无明显差别。
3. 心肌I、III型心肌胶原的表达及I/III比值:模型组(62547.1±2440.8, 49485.0±2020.5,1.26±0.01)与正常对照组(605.1±35.3,528.2±31.6,1.15±0.03)相比,I、III型心肌胶原的表达及比值均升高,差异有统计学意义(P<0.01);氯沙坦治疗组(14572.1±425.1,11847.2±436.9,1.23±0.02)与模型组比较,I、III型心肌胶原的表达及比值均降低,差异有统计学意义(P<0.01),但与对照组比较,I、III型心肌胶原的表达及比值仍均升高,差异有统计学意义(P<0.01)。
4. 心肌组织AT1受体的表达:模型组(6582±562.88)与正常对照组(3623±82.64)相比,AT1受体的表达上调,差异有统计学意义(P<0.01);氯沙坦组(4132±546.25)与模型组相比,AT1受体的表达下调,差异有统计学意义(P<0.01)。 5.心肌组织钙调神经磷酸酶(CaN)活性:与正常对照组(0.283±0.010)相比,模型组(0.465±0.040)CaN活性增高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,氯沙坦治疗组(0.326±0.050)CaN活性降低,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论:
1. 在阿霉素诱导的SD大鼠心肌胶原重塑中,CaN信号通路介导了心肌纤维化的信号转导;
2. SD大鼠的心肌纤维化与AT1受体的表达增加有关;
3. CaN信号通路参与了AT1受体介导的SD大鼠心肌纤维化的信号转导。