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阿尔茨海默病(Alzheimer s Disease, AD)是常见的中枢神经系统退行性疾病,临床以记忆力减退、认知障碍、人格改变为主要特征,其病理学特征是大脑皮层和海马出现β-淀粉样蛋白(beta-amyloid peptide, Aβ)沉积形成老年斑(senile plaques,SP),神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles, NFTs)和特定脑区胆碱能神经元和突触的缺失。对AD的病因研究主要集中在中枢胆碱能损伤、脑内自由基表达过度以及钙稳态失调等几个方面。随着老龄化社会的到来,老年性疾病已成为社会关注和相关学科研究的热点。世界阿尔茨海默病协会将每年的9月21日确定为“世界老年性痴呆宣传日”,呼吁社会关注老年人的健康。流行病学的调查显示,目前世界上AD每年的发病率男性为3.05%,女性为4.82%Bachman 1992)。美国85岁以上老人的发病率高达47.02%。我国65岁以上老人的AD发病率在0.8-6.3%。目前仍缺乏AD的有效治疗药物,因此寻找AD的治疗药物是当前神经药理学研究的热点领域之一。开心散(KXS)始载于唐孙思邈《备急千金要方》,由茯苓、人参各三两,远志、石菖蒲各二两组成。该方主好忘,为益气养心、安神定志的代表方剂,主治心气不足、神志不宁、焦虑失眠、心神怔忡等证。现代药理研究表明,开心散能够改善AD模型动物的学习记忆能力,使不同拟AD模型动物脑组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性升高,丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量降低,同时还能够降低脑组织乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase, AchE)活性的升高,显示了促智方面良好的应用前景。但是,由于中药复方成分复杂、用药剂量大,很难阐明中药各组成成分的具体作用靶点、作用途径以及具体发挥哪方面的作用。因此,对于中药各组分是否有必要参与组方、各组分的组方剂量是否可以有所增减,以达到增效减毒的最终目的,以及各组分具体在哪方面发挥作用的探索倍受重视,对中药的拆方研究也显得尤为重要,但目前为止尚未见到有文献报道关于开心散在此方面的研究。本论文选用开心散为研究对象,以已有的研究结果为基础,运用小鼠跳台、小鼠避暗以及小鼠圆形水迷宫计算机图像实时检测分析处理系统等3种学习记忆行为学方法,观察KXS以及去除茯苓的开心散(QFLKXS)对Aβ、D-半乳糖(D-galactose, D-gal)以及D-半乳糖复合东莨菪碱(D-galactose+Scopolamine, D-gal+Scop)三种拟AD动物模型学习记忆的改善作用；并从氧化自由基、中枢胆碱能系统、脑组织形态学等角度探讨其作用机制,旨在对开心散的组成成分之一茯苓进行拆方研究,从而阐明茯苓在开心散组方中的作用。1.开心散、去茯苓开心散以及开心散组方中四味药对神经细胞的增殖及损伤的保护作用研究采用离体培养SH-SY5Y、PC12细胞实验模型,通过形态学观察、MTT自动微量法检测,发现,不同浓度的开心散、去茯苓开心散、人参和茯苓对SH-SY5Y、PC12细胞均具有增值以及对损伤的保护作用,其中去茯苓开心散较开心散的增值及对损伤的保护作用减弱,组方中人参对细胞的增殖和保护作用最强,茯苓次之,而远志及石菖蒲对细胞则具有损伤作用。2.开心散、去茯苓开心散对拟AD模型动物学习记忆能力的改善作用研究2.1通过小鼠侧脑室注射Aβ25-35建立拟AD动物模型,跳台及Morris水迷宫实验结果提示,开心散能够显著改善模型小鼠的空间学习记忆能力以及被动逃避电刺激能力,而去茯苓开心散的作用减弱或没有改善作用。2.2长期皮下注射D-gal 14周,建立衰老模型小鼠,跳台和避暗检测结果均显示出开心散能够明显改善模型小鼠的被动逃避电刺激能力,而去茯苓开心散则与模型组相似,没有显著差异。2.3 D-gal复合腹腔注射Scop的模型小鼠,得到的结果进一步证实开心散能够显著改善模型小鼠的空间学习记忆能力以及被动逃避电刺激能力,而去茯苓开心散则没有作用,同时海马组织形态学结果显示开心散组与正常对照组的海马组织形态没有显著差异,而去茯苓开心散组则有明显的病理改变。3.KXS、QFLKXS改善学习记忆作用的机制研究对D-gal+Scop模型以及D-gal模型小鼠检测结果表明,KXS能够降低D-gal+Scop以及D-gal模型小鼠脑组织皮层区AchE活力,升高SOD活力,降低MDA含量；相比较而言,QFLKXS则没有改善作用或作用减弱。本文通过三种动物模型,应用Morris水迷宫、跳台、避暗三种行为学检测手段证实开心散能够改善拟AD小鼠的空间学习记忆能力以及被动逃避电刺激能力。跳台和避暗实验结果显示,开心散组及高剂量去茯苓开心散组能不同程度地提高模型小鼠的记忆获得能力,而去茯苓开心散低剂量组则没有明显的改善作用,除此之外,开心散对记忆的保持能力有明显的改善作用,提示茯苓在复方开心散改善拟AD动物学习记忆障碍中具有重要作用。Morris水迷宫结果提示,开心散能够改善模型小鼠的空间学习记忆能力,而去茯苓开心散的作用减弱或没有改善作用。另外,开心散组能显著降低D-gal+scop和D-gal模型小鼠大脑皮层的AchE活力,升高SOD活力,降低MDA含量,具有明显的抗氧化作用；而去茯苓开心散在同等剂量其改善模型小鼠学习记忆障碍的作用则减弱甚至没有作用。因此,进一步证实茯苓在开心散改善拟AD动物学习记忆障碍作用中是不可缺少的重要组成部分,其作用机制可能与抑制大脑皮层AchE活力,升高SOD活力,降低MDA含量有关。综上所述,本文实验结果提示,开心散对SH-SY5Y和PC12细胞具有增殖和损伤保护作用,其中人参起主要作用,茯苓次之,而远志和石菖蒲则具有明显的损伤作用。同时,整体实验结果显示,开心散能够改善拟AD动物模型的学习记忆能力,并且茯苓在开心散发挥改善拟AD动物学习记忆能力中是不可替代的重要组成部分,本文为开心散的开发和利用提供了实验依据。