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蜂胶黄酮具有抗癌活性,它的提取物Pinobanksin-3-acetate(PB3A)可以抑制HCT116、SW480、jurkat、A549、HepG-2、Hela、MDA-MB-231、EC-109、SGC-7901等细胞的增殖并诱导它们的凋亡,但PB3A对宫颈癌细胞SiHa和大肠癌细胞HT29是否有增殖抑制作用尚未清楚。本研究检测PB3A对SiHa和HT29细胞的增殖抑制与诱导凋亡的作用及其分子机制,旨在找出PB3A对这两个细胞作用强度的异同点,为PB3A的开发利用提供理论依据。在前期研究中,我们用100μg/mL PB3A处理大肠癌SW480细胞,对此进行了人类全基因组表达谱芯片技术筛查分析,发现了差异表达基因(HSPA6、C3ORF63、HMOX1、DNAJA4、SNAI2、KLHL20),并验证了芯片结果的真实性。本研究中用40μg/mL PB3A干预宫颈癌SiHa细胞24h,用实时荧光定量PCR技术对候选基因mRNA的表达量进行检测,证明PB3A是否改变候选基因的表达水平,并与前期研究进行结合对比PB3A对SW480和SiHa细胞中候选基因表达水平的影响是否一致。本论文工作包括以下两个部分:1.蜂胶黄酮PB3A对SiHa和HT29细胞的增殖抑制作用本研究的目的是检测PB3A对宫颈癌SiHa和大肠癌HT29细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用,比较它们对PB3A的敏感性,探讨PB3A的抗肿瘤作用。体外培养SiHa和HT29细胞,在倒置显微镜下观察不同浓度(10、20、30、40μg/mL)PB3A作用前后各细胞株的形态学变化。应用MTT法绘制细胞生长曲线,不同浓度(10、20、30、40μg/mL)PB3A不同时间(24、48、72h)对SiHa和HT29细胞作用后,检测OD值、计算半数抑制浓度(IC50)。利用流式细胞仪检测不同浓度PB3A(20、30和40μg/mL PB3A和15μg/mL顺铂)诱导的两个细胞株的凋亡率。结果在显微镜下观察发现细胞形态发生改变,细胞体积缩小、皱缩、细胞从梭性变为圆形,出现核固缩,胞质混浊,培养液中出现较多的悬浮细胞,这种特点随PB3A浓度的增加和干预时间的延长越来越明显。MTT法检测发现PB3A在体外可显著抑制SiHa和HT29细胞的增殖,PB3A作用SiHa细胞24h、48h、72h时的IC50值分别为40.84μg/mL、15.24μg/mL、13.98μg/mL,PB3A作用HT29细胞24h、48h、72h时的IC50值分别为74.12μg/mL、64.77μg/mL、43.87μg/mL。40μg/mL PB3A对SiHa细胞的抑制作用高于对HT29的抑制作用,并与作用时间和剂量呈正相关。20μg/mL、30μg/mL和40μg/mL PB3A均可诱导SiHa和HT29细胞的凋亡。最高浓度(40μg/mL)PB3A诱导的SiHa和HT29细胞早期凋亡率分别为23.45%和20.8%,其中SiHa的凋亡率高于HT29的凋亡率。PB3A对SiHa和HT29细胞的诱导凋亡作用呈剂量依赖性。2.用实时荧光定量PCR法检测Si Ha细胞中候选基因的表达在前期研究中的芯片结果显示,用100μg/mL PB3A处理SW480细胞24h后,细胞中HSPA6、C3ORF63、HMOX1、DNAJA4、SNAI2等基因均上调表达(ΔCt比较,P<0.01),验证结果与芯片结果一致;而KLHL20的表达差异没有统计学意义(ΔCt比较,P>0.05)。本实验用40μg/mL PB3A干预SiHa细胞24h后,用Trinzol试剂抽提细胞总RNA,将总RNA逆转录为cDNA。以β-actin做内对照。用实时荧光定量PCR检测各基因的表达情况。实验结果以mean士SD表示。以SPSS19.0统计分析软件对PB3A干预组与未干预组基因的ΔCt值分别进行两独立样本的t检验(双侧)分析。结果显示,与对照组相比,PB3A干预组中SNAI2基因下调表达(差异倍数为0.15,ΔCt比较,P<0.01),该趋势与前期结果不一致;KLHL20和HSPA6上调表达,差异倍数分别为3.51(ΔCt比较,P<0.01)和5.88(ΔCt比较,P<0.05),HSPA6的表达趋势符合前期研究结果,KLHL20的表达趋势符合基因芯片结果但不符合验证结果;其余三条基因(DNAJA4、HMOX1、C3ORF63)的表达水平上没有显著变化。