目的　　目前，关于阿尔茨海默病(Alzheimersdisease，AD)的发病机制尚不十分清楚，多数学者认为Aβ在脑组织的沉积是各种原因诱发AD的共同通路。Aβ是由其前体蛋白APP裂解而来，它可以通过星形胶质细胞的谷氨酸受体亚基NR2B及谷氨酸受体阻断剂地卓西平马来酸盐(dizocilpinemalte，MK801)间接影响细胞的释放功能，从而减轻AD的病理变化。星形胶质细胞的特征性表达产物S100β过量表达可能是诱导神经病理学变化的重要原因，同时它与Aβ协同启动凋亡系统，而Bax和Bcl-2正是凋亡反应的主要指标。　　近年来关于谷氨酸的离子型受体NMDA在AD发病机制中的作用备受关注，长时间NMDA受体被激活，可导致神经细胞持续释放Aβ，而MK801却可以阻断NMDA受体的离子通道，从而防止谷氨酸损伤神经细胞。也有研究证明老年大鼠脑内NR2B的mRNA和蛋白质均明显减少，而提高NR2B的含量，却可以改善大鼠的学习记忆能力。　　但是，国内外关于Aβ损伤大鼠额叶及颞叶皮层星形胶质细胞活化时产生的S100β与Ca2+，以及Aβ与NR2B关系的研究尚少。因此，本研究拟采用体内外研究相结合的方法，进一步探讨Aβ是否能够通过NMDA受体对星形胶质细胞产生影响，同时对比观察MK801对Aβ大鼠额叶及颞叶皮层星形胶质细胞细胞与锥体细胞毒性的保护作用，为AD的预防及治疗提供可靠的形态学、分子生物学及免疫学基础。　　研究方法　　一、体内实验　　（一）动物模型制作及分组　　选用中国医科大学实验动物中心在相同环境下饲养的SPF级Wistar雄性大鼠60只，4月龄，体重250～270g，随机分为空白对照组、Aβ损伤组和MK801组，每组各20只。选择左侧侧脑室为注射靶区。空白对照组:不做任何处理。Aβ损伤组:注射Aβ25-35(5g/L)溶液3μL，以后每天给药2μL，持续2周。MK801组:注射Aβ25-35(5g/L)溶液3μL，以后每天给药2μL，持续2周。再通过微量给药系统注射MK801(0.03g/L)溶液，每次2μL，持续1周。　　（二）Morris水迷宫行为学测试　　（三）免疫组织化学方法　　（四）Westernblot方法　　二、体外实验　　（一）星形胶质细胞体外培养、鉴定及分组　　(1)空白对照组:不做任何处理;(2)Aβ损伤组:给予原代培养第20天的细胞Aβ25-3510μM/L孵育24h;(3)MK801组:首先给予Aβ25-3510μM/L孵育24h，再给予MK801，终浓度为10μM/L每隔24h给药一次，共3次。　　（二）细胞活力检测　　（三）Hoechst33258检测细胞凋亡　　（四）钙离子荧光探针技术　　（五）免疫荧光技术　　三、统计学分析　　本实验数据利用SPSS18.0，Grampadprism5，ImageJ1.5.1，Imageproplus6.0和Photoshop8.0统计软件进行分析，所得数据用均数±标准差（mean±s）表示，P＜0.05有统计学意义，P＜0.01有显著性差异。　　结果　　一、体内实验　　（一）Morris水迷宫测试大鼠行为学变化　　1、平均游泳速度　　Aβ损伤组与空白对照组比较及MK801组与Aβ损伤组比较，平均游泳速度均无差异。　　2、平均逃避潜伏期　　Aβ损伤组与空白对照组比较逃避潜伏期延长，MK801组与Aβ损伤组比较逃避潜伏期缩短。　　3、目标象限游泳时间百分比　　Aβ损伤组与空白对照组比较游泳时间百分比延长;MK801组与Aβ损伤组比较游泳时间百分比缩短。　　4、穿越平台次数　　Aβ损伤组与空白对照组比较及MK801组与Aβ损伤组比较，穿越平台次数均无差异。　　（二）免疫组化方法观察额叶皮层四种蛋白的表达　　1、S100β蛋白的表达　　镜下观察空白对照组S100β阳性细胞较少，Aβ损伤组阳性细胞数较空白对照组明显增多;MK801组阳性细胞数较Aβ损伤组减少。　　2、Bax、Bcl-2蛋白的表达　　镜下观察Aβ损伤组Bax阳性细胞数较空白对照组明显增多;各实验组Bcl-2蛋白的表达存在明显差异，Aβ损伤组阳性细胞数较空白对照组明显减少;MK801组阳性细胞数较Aβ损伤组增多。　　3、NR2B蛋白的表达　　镜下观察与空白对照组比较，Aβ损伤组阳性细胞数明显减少;与Aβ损伤组比较MK801组阳性细胞数增多。　　（三）Westernblot方法检测额叶及颞叶皮层四种蛋白的表达　　对条带灰度进行灰度测定和分析，结果显示:S100β在Aβ损伤组额叶与颞叶皮层中的表达较空白对照组明显上调，与Aβ损伤组比较MK801组S100β表达下调。Bax在额叶及颞叶皮层的表达一致，与空白对照组比较，Aβ损伤组的Bax表达明显上调，与Aβ损伤组比较，MK801组的Bax表达下调。与空白对照组比较Bcl-2在Aβ损伤组额叶皮层表达上调，与Aβ损伤组比较Bcl-2在MK801组的表达上调;与空白对照组比较Bcl-2在Aβ损伤组颞叶皮层的表达下调，与Aβ损伤组比较其在MK801组的表达明显下调。NR2B在额叶的Aβ损伤组的表达较空白对照组下调，其在MK801组颞叶皮层的表达与Aβ损伤组比较上调。　　二、体外实验　　（一）细胞活力检测　　MTT法检测MK801对Aβ25-35所致细胞活力的变化，与空白对照比较，随药物浓度的加大Aβ损伤组与空白对照组比较细胞活力下降，MK801组与Aβ损伤组比较细胞活力升高。　　（二）Hoechst33258检测细胞凋亡　　检测空白对照组、Aβ损伤组和MK801组细胞的凋亡，空白对照组凋亡没有发生变化，趋势稳定，Aβ损伤组及MK801组细胞凋亡随Aβ25-35浓度的增大而加重。与空白对照组比较Aβ损伤组的细胞凋亡加重，而MK801组细胞凋亡较Aβ损伤组减轻。　　（三）钙离子荧光探针技术　　空白对照组、Aβ损伤组和MK801组细胞随着时间的延长，细胞内钙离子荧光强度逐渐增强，Aβ损伤组与空白对照组比较细胞内钙离子增多显著，MK801组与Aβ损伤组比较细胞内钙离子明显减少。　　（四）免疫荧光技术　　Aβ损伤组与空白对照组比较S100β表达的红色荧光较多;MK801组与Aβ损伤组比较S100β的表达减少。与空白对照组比较Aβ表达的绿色荧光较多;MK801组与Aβ损伤组比较Aβ的表达减少。　　结论　　1、Aβ25-35大鼠额叶及颞叶皮层锥体细胞Bax表达上调，颞叶Bcl-2表达下调，并增加细胞凋亡。　　2、星形胶质细胞能够通过上调NR2B亚基的表达缓解Aβ25-35的神经毒性。　　3、MK801能够明显下调Aβ损伤大鼠Bax的表达水平，上调Bcl-2的水平;并缓解Aβ25-35所致的细胞凋亡形态学的变化。　　4、MK801能够明显下调Aβ损伤大鼠星形胶质细胞S100β与上调NR2B的表达水平。　　5、Aβ25-35致细胞活力下降与细胞内钙离子升高，而MK801却可以缓解这一变化。