荧光定量PCR检测阴道分泌物中VLY基因的临床应用

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目的:建立荧光定量PCR检测阴道加德纳菌的方法学;对细菌性阴道病患者和正常对照组阴道分泌物中阴道加德纳菌VLY基因进行定量检测,研究细菌性阴道病发病机制。   研究对象及方法:2008年12月至2009年9月间北京友谊医院妇科门诊、北京市房山区妇幼保健院与北京朝阳妇幼保健院BV确诊病人98例,年龄18岁-54岁,健康体检病人101例作为对照组,年龄20-55岁。诊断标准采用Amesls诊断标准。采用以VLY基因为靶基因的荧光定量PCR对阴道分泌物中阴道加德纳菌进行定量分析。   实验结果:本实验设计的引物能够很好的扩增VLY基因目的片段,为了获得VLY基因TaqMan探针法实时荧光定量PCR检测的阳性对照,我们构建了含VLY基因的重组质粒,测序结果表明所克隆的VLY基因1422bp片段核昔酸序列与报道的相关序列相似性为100%,作为阳性对照和标准品使用时取得良好效果。建立的VLY基因TaqMan实时荧光定量PCR仅对阴道加德纳菌VLY基因有阳性检测结果,对其他细菌基因组DNA检测为阴性,有较高的检测特异性。经过条件优化,实验采用所建立的VLY基因TaqMan实时荧光定量PCR,可有效地检出可检测出1x102拷贝数pMD19-T-VLY重组质粒,有较高的敏感度。采用该荧光定量PCR对正常人和BV患者阴道分泌物中VLY基因进行检测,两者VLY基因的量和检出率有明显统计学差异。   结论:实验所建立的阴道加德纳菌VLY基因TaqMan实时荧光定量PCR具有决速、稳定、敏感、特异等优点。适用于BV实验室诊断及其他部位Gv感染分子诊断。
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