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目的:探讨应用“益阴助阳活血治法”对宏观指标血流动力学、微观指标病理及神经内分泌因子等改变的影响,进而考察该法对心衰大鼠心脏及心肌纤维化程度的影响;更进一步在细胞水平研究,通过检测经异丙肾上腺素(ISO)诱导损伤的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞的相关指标,阐述“益阴助阳活血治法”抗心肌凋亡作用可能的机制,以期对临床治疗慢性心力衰竭提供更多的方法及途径。方法:1、建立在体SD大鼠心衰模型,腹腔麻醉雄性SD大鼠(1%戊巴比妥钠20-25 mg/kg),皮下注射ISO(170mg/kg,间隔24h)。一般在4周左右可形成心衰模型,行彩超检查,左心室短轴切面。模型建立标准:射血分数≤45%。2、摘取各组SD大鼠的心肌组织,应用Masson染色考察不同实验组大鼠心肌胶原组织及纤维化的情况。3、应用ELISA法考察“益阴助阳活血方”对各实验组大鼠血清中的醛固酮(ALD)、大鼠脑钠素(BNP)、大鼠内皮素1(ET-1)及大鼠血管紧张素Ⅱ(ANGⅡ)等相关指标的影响。4、制备空白对照组、“美托洛尔”阳性对照组及“益阴助阳活血方”组含药血清,建立异丙肾上腺素(ISO)诱导的体外原代心肌细胞损伤模型。CCK-8法检测“益阴助阳活血方”对ISO诱导的SD大鼠乳鼠原代心肌细胞损伤模型是否有保护作用。5、应用Annexin-V/PI双染法,通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况。6、应用Hochest-PI双染法观察“益阴助阳活血方”对损伤后原代心肌细胞细胞核的形态的影响。7、应用蛋白质免疫印迹(Western blot)法考察“益阴助阳活血方”对损伤后原代心肌细胞的Bcl-2,Bax及Bak蛋白表达的影响。结果:1、与正常组比较,模型组SD大鼠左室舒张末期内径(LVDd)、左室收缩末期内径(LVDS)水平明显上升;左室舒张末期后壁厚度(LVPWd)、左室收缩末期后壁厚度(LVP Ws)、左心室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、左室舒张末期室间隔厚度(LVSd)及左室收缩末期室间隔厚度(LVSs)的水平显著下降,用“益阴助阳活血方”治疗后,LVDd、LVDS、LVSd、LVSs、LVPWd、LVPWs、EF及FS均得到不同程度的改善。2、相较于模型组,美托洛尔组及“益阴助阳活血方”中、高剂量组等各治疗的心肌组织周围胶原组织含量有所减少,纤维化程度有所降低。3、相较于正常组,模型组大鼠血清中ALD、BNP、ET-1、ANGⅡ的水平均呈现明显上升趋势。与模型组相比,给予“益阴助阳活血方”治疗组的大鼠,ALD、BNP、ET-1、ANGⅡ水平均呈下调趋势。4、与空白组(0%含药血清)比较,各给药组(5～20%含药血清)原代心肌细胞的活力上调(P<0.05)。5、与模型组比较,美托洛尔组凋亡率下调(P<0.01),益阴助阳中、高剂量组凋亡率下调(P<0.01)。6、相较于模型组,美托洛尔组及益阴助阳中、高剂量组亮蓝色凋亡细胞有所减少。7、相较于正常组,模型组的Bcl-2蛋白的表达下调,Bak及Bax蛋白的表达上调;相较于模型组,“益阴助阳”高剂量组Bcl-2蛋白的表达呈上调趋势,Bak及Bax蛋白的表达呈下调趋势。结论:应用“益阴助阳活血方”治疗慢性心力衰竭具有较好的疗效,可减少心肌胶原的产生,降低 LVDd 及 LVDS 水平,提高 LVSd、LVSs、LVPWd、LVPWs、EF 及 FS 水平,可下调血清中ALD、BNP、ET-1、ANGII水平。体外SD大鼠乳鼠原代心肌细胞培养体系研究表明,“益阴助阳活血方”对ISO损伤的乳鼠原代心肌细胞有抗凋亡作用。