狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞生物学特性的影响

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目的:通过体外培养人皮肤成纤维细胞,观察狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对其生物学性状的影响。方法:人皮肤成纤维细胞通过体外培养,培养液中加入不同浓度的胶原蛋白肽,分为实验对照组和空白对照组,使用酶标法检测狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对成纤维细胞增殖的影响、使用Annexin V/PI双染法检测狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对成纤维细胞凋亡的影响;使用Elisa试剂盒检测狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对成纤维细胞分泌TGF-β1、SOD等指标的表达变化;使用Western blot法检测I型胶原蛋白的表达;使用划痕实验法检测胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞迁移率的影响。结果:1.细胞增殖:不同浓度的胶原蛋白肽处理人皮肤成纤维细胞48h后,通过CCK-8试剂盒检测胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞增殖的作用。结果显示经胶原蛋白肽刺激后,成纤维细胞增殖速度呈现剂量依赖效应,随着胶原蛋白肽浓度的增高,细胞的增殖速度也加快,与空白对照组相比具有显著性差异(P<0.05)。在胶原蛋白肽浓度为25mg/ml的条件下,成纤维细胞增殖速度最快。2.细胞凋亡:25mg/ml胶原蛋白肽处理24h后,我们通过Annexin-v-FITC/PI试剂盒检测了胶原蛋白肽对人皮肤成纤维细胞凋亡的影响。经胶原蛋白肽处理后,相比空白对照组,成纤维细胞的凋亡比率显著下降(P<0.05)胶原蛋白肽可有效促进人皮肤成纤维细胞的增殖,抑制细胞凋亡,并可显著提高成纤维细胞分泌TGF-β1、SOD等活性因子的含量(t=4.07,F=774.23、2 100.63,P<0.05)。与空白对照组相比,胶原蛋白肽组细胞迁移能力增强(P<0.05)3.Elisa实验结果:经不同浓度胶原蛋白肽刺激后,结果显示TGF-β1和SOD表达均升高,并呈剂量依赖性,25mg/ml及50mg/ml的浓度较空白对照组差异均具有极其显著性差异(P<0.01),其中,以50mg/ml作用最为显著。4.划痕实验:结果显示,经过胶原蛋白肽作用后的细胞迁移率显著提高(P<0.01)。5.Western blot实验:结果显示,经过胶原蛋白肽作用后的人皮肤成纤维细胞I型胶原蛋白的表达量提高(P<0.05)。结论:狭鳕鱼皮胶原蛋白肽能促进成纤维细胞的增殖,提高人皮肤成纤维细胞存活率,以胶原蛋白浓度为25mg/ml时作用最为显著,并能抑制细胞的凋亡。狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对TGF-βI、SOD的分泌表达具有显著的促进作用,并呈剂量依赖性。狭鳕鱼皮胶原蛋白肽能促进人皮肤成纤维细胞的迁移,促进I型胶原蛋白合成可能在创伤愈合中发挥重要作用。
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