【摘 要】
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背景胰岛素样生长因子受体1(IGF-1R)在人非小细胞肺癌中异常高表达,是非小细胞肺癌治疗的理想靶点;力达霉素(LDM)是一种强效的抗肿瘤抗生素,它由辅基蛋白(LDP)与发色团(AE)两
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背景胰岛素样生长因子受体1(IGF-1R)在人非小细胞肺癌中异常高表达,是非小细胞肺癌治疗的理想靶点;力达霉素(LDM)是一种强效的抗肿瘤抗生素,它由辅基蛋白(LDP)与发色团(AE)两部分组成,LDM与抗体或配体的偶联物显示了良好的抗肿瘤疗效。目的制备一种由胰岛素样生长因子1(insulin-like growth factor 1,IGF-1)和力达霉素(lidamycin,LDM)构成的融合蛋白,并对其抗非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)活性进行检测。方法合成融合蛋白基因ldp-igf并将其插入到p ET30a载体中,再将获得的重组表达载体p ET30-ldp-igf转化至大肠杆菌中进行诱导表达,得到融合蛋白LDP-IGF。采用细胞免疫荧光实验和基于流式细胞术的亲和实验检测LDP-IGF蛋白与NSCLC细胞的结合能力;在体外将LDP-IGF蛋白与LDM的发色团(AE)分子进行组装,获得烯二炔强化融合蛋白LDP-IGF-AE。MTT实验检测LDP-IGF-AE对不同NSCLC细胞的体外杀伤活性,PI染色结合流式细胞术检测LDP-IGF-AE对细胞周期的影响,LDP-IGF-AE对NSCLC细胞的凋亡诱导作用采用Annexin V-FITC/PI双染实验进行检测。结果经过诱导LDP-IGF蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达。采用Ni2+亲和层析技术对包涵体蛋白进行分离纯化,经过变性和分步透析复性后获得了高纯度、有活性的融合蛋白LDP-IGF。亲和实验结果显示LDP-IGF蛋白与NSCLC细胞具有高度的亲和力。与AE分子进行组装后获得的强化融合蛋白LDP-IGF-AE对不同的NSCLC细胞系均有非常强烈的杀伤活性,且其杀伤活性显著高于LDM。细胞周期阻滞和细胞凋亡实验结果显示极低浓度的LDP-IGF-AE处理可使NSCLC细胞阻滞于G2/M期,并可显著地诱导细胞发生凋亡。结论融合蛋白LDP-IGF-AE对NSCLC细胞有强大的体外抗肿瘤活性,具有发展成为NSCLC靶向治疗剂的潜能。
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