东革阿里不定根诱导及液体培养关键技术

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:huangxiaojie33
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东革阿里(Eurycoma longfolia)是苦木科的一种多年生乔木,主产于赤道附近的东南亚国家。东革阿里可治疗疟疾、男性性功能障碍,并且能够减轻萎靡、抗溃疡、提高体力,市场需求量极高。但由于东革阿里对生长环境要求严苛,种植难度大,生长周期长,因此供不应求。本实验以东革阿里幼嫩的茎为实验材料诱导愈伤组织,并且对其进行液体扩大培养和不定根诱导,研究其有效成分宽缨酮的含量,为今后东革阿里的工厂化生产次生代谢产物,缓解东革阿里市场短缺及野生资源保护问题提供技术和理论依据。主要结果如下:(1)以幼嫩的茎段做外植体,在MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L KT培养基上愈伤组织诱导率为67.2%;在2.0 mg/L 2,4-D+0.6 mg/L 6-BA+0.2 mg/L KT激素组合(其影响显著性顺序为2,4-D>6-BA>KT)、NO3-/NH4+比值2:1(总含量为60 mmol/L)和25℃暗培养条件下愈伤组织质地更疏松、生长能力强、愈伤组织增殖倍数达到最高5.86倍;东革阿里愈伤组织的生长曲线呈“S”型,其最佳培养时间为25天。(2)将获得的愈伤组织转接至液体MS培养基上,探究最佳初始接种量、转速、蔗糖浓度的结果是分别为8%(w/v)、100 rpm、60 g/L;东革阿里悬浮细胞生长曲线基本呈“S”形,最佳继代时间为接种后第18天。东革阿里悬浮细胞扩大培养时,反应器的通气率为0.100 m~3/(m~3·min)时悬浮细胞增殖倍数最高3.32倍。(3)在B5基本培养基中诱导产生的不定根诱导率最高、根数最多,根长最大;2.0mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT是诱导不定根的最佳激素配比,其影响显著性顺序为IBA>6-BA>KT;NO3-/NH4+比例为3:1(总含量为30 mmol/L)可有效促进不定根的发生。(4)愈伤组织、悬浮细胞和不定根中宽缨酮分别约为野生树根中宽缨酮含量的1.33、1.30和1.65倍。(5)不定根提取物对大肠杆菌无明显抑制作用;对藤黄八叠球菌的抑菌效果最为明显,其次是金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌;抑菌强度与其浓度成正相关。
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