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目的:基于“毒损肾络”理论研究槲皮素(Quercetin,Qu)不同给药时间对转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的肾小球足细胞转分化(Epithelial Mesenchymal Transition,EMT)的抑制作用。方法:将体外原代培养的细胞用光镜、电镜及免疫组织化学染色法进行鉴定,确定为足细胞后,随机分为对照组、模型组、Qu先干预组、Qu同时干预组和Qu后干预组共5组。对照组常规培养;模型组用5ng/ml TGF-β1诱导48h;先干预组用50μmol/L Qu干预24h后,再用5ng/ml TGF-β1继续诱导24h;同时干预组加入50μmol/L Qu和5ng/ml TGF-β1干预48h;后干预组先用5ng/ml TGF-β1干预24h,再用50μmol/L Qu干预24h。将上述各组细胞分别用Western blot、RT-PCR技术检测足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin)、Wilms瘤抑癌因子-1(WT-1)和足细胞EMT标志物波形蛋白(Vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle Actin,α-SMA)的蛋白及mRNA表达量,选择相关统计学软件进行组间差异比较。结果:1.经细胞形态学观察(光镜、电镜)和免疫组化鉴定,确定所培养细胞为足细胞。正常足细胞形态不规则,呈分叉状,有较多细而长的突起,典型者可见多条“树枝样”稠而密的突起。经TGF-β1诱导后,足细胞的胞体变大,突起缩短甚至消失。Qu不同时间干预组的足细胞形态均有所改善,表现为细胞突起较多,部分细胞可见“树枝样”足细胞典型结构,其中以Qu先干预组最为明显。2.蛋白表达量:与对照组相比较,模型组足细胞Nephrin、WT-1明显降低(P均<0.01),而Vimentin、α-SMA明显升高(P均<0.01)。与模型组相比,三种不同干预方法下,Nephrin蛋白表达量以后干预组最高(P<0.01);WT-1蛋白表达量以同时干预组最高(P<0.01);Vimentin蛋白表达量以先干预组最低(P<0.01);α-SMA蛋白表达量以先干预组最低(P<0.01)。3.mRNA表达量:与对照组相比较,模型组足细胞Nephrin和WT-1的mRNA表达量明显降低(P均<0.01);而Vimentin、α-SMA的mRNA表达量均明显升高(P均<0.01)。与模型组相比,三种不同干预方法下,Nephrin和WT-1的mRNA表达量均以先干预组最高(P均<0.01);Vimentin和α-SMA的mRNA表达量均以先干预组最低(P均<0.01)。结论:1.联合运用酶消化法、差异过筛法和鼠尾胶原包被法是一种操作相对简便、重复性较好的足细胞原代培养方法,WT-1、Nephrin可作为足细胞鉴定的标记蛋白。2.TGF-β1能够诱导足细胞形态学改变,促进足细胞EMT的发生发展。3.Qu能够抑制TGF-β1诱导的足细胞EMT,且Qu先干预组能够更好地抑制TGF-β1诱导的足细胞EMT,其作用机制可能与抑制TGF-β信号转导通路中的相关信号分子、维持足细胞生理结构的完整性从而保护肾小球滤过屏障有关。