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血吸虫感染引起的血吸虫病仍然是危害人类健康的一种重要的公共卫生疾病。在我国较为流行的是日本血吸虫病,但是目前没有可以有效防治血吸虫感染的疫苗。血吸虫病的治疗主要还是依赖于化学药物吡喹酮,但是该药物不能防止血吸虫的重复感染,因此迫切需要对血吸虫生长发育机理进行深入研究,探索血吸虫防治的新方法。我们前期研究发现凋亡抑制因子可能在血吸虫发育和寄生过程中发挥重要作用,其中凋亡抑制蛋白(IAP)通过杆状病毒IAP的重复域(BIR)在调控凋亡进程中发挥着重要的作用,有可能是血吸虫病控制的一个潜在的药物新靶标。本研究通过生物信息学分析发现了一个新的日本血吸虫凋亡抑制因子Sj BIRP,针对该凋亡抑制因子,本文开展以下三个方面的研究:(一)日本血吸虫凋亡抑制因子Sj BIRP的克隆表达及生物信息学分析通过生物信息学分析,我们发现一个与小鼠直系同源的血吸虫BIRP(Gen Bank ID:AAW27178.1),利用PCR方法我们成功扩增出来日本血吸虫Sj BIRP的c DNA片段,序列分析表明扩增的该c DNA片段包含一个765bp的开放阅读框,编码一个预测分子量为20.14k Da的BIRP蛋白。多重序列分析表明日本血吸虫的BIRP序列与人有50%的相似性,与褐家鼠有44.0%的相似性,与小家鼠有46%的相似性。系统发育树分析显示Sj BIRP序列定位于无脊椎动物组中,与脊椎动物组相距较远。另外,构建了Sj BIRP的原核质粒,并获得原核表达重组蛋白,该蛋白经过了ESI-Q-TOF质谱鉴定分析。(二)日本血吸虫凋亡抑制因子Sj BIRP在血吸虫不同期别、性别和不同宿主中的表达分析利用实时定量PCR分析显示日本血吸虫凋亡抑制因子Sj BIRP在血吸虫不同发育阶段(7d,14d,21d,28d,35d,42d)、不同性别(雌雄)和不同宿主(小鼠、大鼠和新西兰大白兔)中的表达情况。结果显示,Sj BIRP在日本血吸虫7个时期均有表达,尤其在童虫(7d)的时候显著升高。另外,Sj BIRP在雌虫中的表达显著高于雄虫,在宿主大鼠中虫体的表达高于小鼠和新西兰大白兔中虫体,表明日本血吸虫凋亡抑制因子Sj BIRP可能在血吸虫发育和寄生调控中发挥重要作用。(三)日本血吸虫凋亡抑制因子Sj BIRP的功能研究将纯化的重组融合蛋白r Sj BIRP,注射到BALB/c小鼠皮下,制备了多克隆抗体,ELISA分析表明血清效价为1:6400,进一步通过Western blot分析显示r Sj BIRP多克隆抗体有较好的特异性。另外,构建了Sj BIRP真核表达质粒,转染哺乳动物细胞,发现Sj BIRP质粒能够抑制Act D诱导的细胞凋亡。进一步研究表明r Sj BIRP也能够抑制虫体组织裂解液中的caspase3/7的活性,表明Sj BIRP可能参与血吸虫的细胞凋亡调控。总之,本研究初步表明Sj BIRP可能在血吸虫发育和寄生过程中发挥着重要调控功能,有可能是作为血吸虫病控制的一个潜在的药物靶标。