青藤碱对人外周血CD4T细胞增殖和细胞内Ca浓度影响的体外研究

来源 :南华大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ligang_nc1
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目的:通过研究青藤碱(Alkaloidsinomenine,SIN)对人外周血CD4+T细胞增殖和细胞内Ca2+浓度的体外影响,探讨SIN对人外周血CD4+T细胞免疫抑制作用的效应和分子生物学机制,为SIN在器官移植领域中的临床应用提供理论依据,以期为器官移植受者提供安全、有效和价格低廉的免疫抑制治疗方案。   方法:在衡阳市中心血站抽取一个健康人肘静脉血50ml,肝素(10U/ml)抗凝。用淋巴细胞分离液从血液标本中分离PBMC,并制成PBMC悬液。通过免疫磁珠分离法从PBMC悬液中分选CD4+T细胞。将CD4+T细胞用10%FCSRPMI-1640完全培养液在37℃、5%C02条件下培养。CD4+T细胞经终浓度为5ug/ml的PHA和终浓度为100U/ml的IL-2扩增7天后,均分为5组细胞培养并作以下处理:(1)、空白对照组:细胞培养液中不加入任何药物;(2)、CsA组:细胞培养液中加入终浓度为50ng/ml的CsA溶液;(3)、低浓度SIN组:细胞培养液中加入终浓度为10umol/L的SIN溶液;(4)、中浓度SIN组:细胞培养液中加入终浓度为200umol/L的SIN溶液;(5)、高浓度SIN组:细胞培养液中加入终浓度为1000umol/L的SIN溶液。6小时后,各组细胞培养液中加入终浓度为1ug/ml的抗CD3单克隆抗体。继续培养24小时后,每组细胞均分为3份细胞,对各份细胞进行检测:1)、MTT比色法检测细胞增殖;2)、FCM检测细胞内Ca2+浓度。   结果:1、MTT比色法测定OD值,计算细胞增殖抑制率(%):(1)、空白对照组:0.00±0.00;(2)、CsA组:72.62±0.85;(3)、低浓度SIN组:2.25±1.58;(4)、中浓度SIN组:27.65±1.65;(5)、高浓度SIN组:40.12±1.08。高浓度SIN组、中浓度SIN组与其它各组比较均有显著性差异(P<0.05);低浓度SIN组与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05);CsA组的细胞增殖抑制率最高SIN的浓度与人外周血CD4+T细胞增殖抑制率之间存在显著性正相关。2、FCM检测细胞内Ca2+浓度结果(以Ca2+荧光强度表示):(1)、空白对照组:11.00±0.20;(2)、CsA组:11.90±0.27;(3)、低浓度SIN组.11.30±0.26;(4)、中浓度SIN组:7.57±0.15;(5)、高浓度SIN组:6.00±0.10。中浓度SIN组、高浓度SIN组与其它各组比较均有显著性差异(P<0.05);低浓度SIN组与对照组、CsA组分别比较无显著性差异(P>0.05);SIN的浓度与人外周血CD4+T细胞内Ca2+浓度之间存在显著性负相关。3、经不同浓度的SIN处理后,人外周血CD4+T细胞增殖抑制率和细胞内Ca2+浓度之间存在显著性负相关。结语:SIN能浓度依赖性地抑制人外周血CD4+T细胞增殖和细胞内Ca2+浓度升高。SIN对人外周血CD4+T细胞免疫抑制作用的分子生物学机制与其抑制细胞内Ca2+浓度升高相关,它有潜力成为移植免疫抑制药物的新成员。
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