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脑血管疾病发病机制及防治药物的研究均需借助于理想的动物模型,许多研究者都希望对脑缺血动物的神经行为功能进行客观定量描述,以便能准确判断脑缺血的病理进展和预后,并为抗脑缺血药物的筛选建立简便而灵敏的指标。脑缺血是发病率,致残率和致死率均高的常见神经系统疾病,其中,局灶性脑缺血突出的临床表现为对侧神经功能缺损,如偏瘫。观察神经行为功能缺损不仅对临床脑卒中病人很重要,在局灶性脑缺血动物模型中也同样重要。国外报道评定脑缺血模型动物神经行为功能缺损的方法有Bederson等0~3分分级方法、网屏测验、转棒测验和握-引测验等,但从目前国内外神经保护药物研究现状来看,评价脑缺血偏瘫神经行为功能缺损的方法还较为粗放,特别是要确定啮齿类动物脑缺血后的神经行为功能缺损还是有点困难,缺乏客观,定量、规范化的评价系统。本课题的主要目标是:改进局灶性脑缺血偏瘫神经行为功能缺损症状的评定方法,采用悬挂试验计算机分析和爬板试验综合评分法来定量检测神经行为功能,分析与小鼠局灶性脑梗死体积的相关性,将爬板、悬挂试验综合评价脑缺血小鼠神经行为功能方法和传统Bederson等0~3分分级方法进行比较,从而找出评价局灶性脑缺血偏瘫模型神经损伤较为准确的方法。用ONO-1078药物干预组和生理盐水对照组进行小鼠神经行为功能综合评分、测定TTC染色脑片梗死体积、与Bederson等0~3分分级方法进行相关性比较,以证实爬板,悬挂试验综合评价脑缺血小鼠神经行为功能的准确性和可靠性,为筛选和评价神经保护药物提供依据。 浙江大学硕士学位论文 本研究采用线栓法阻塞小鼠大脑中动脉(MCA),复制局灶性脑缺血模型,缺血 后24h通过爬板试验和悬挂试验综合评分法定量检测局灶性脑缺血引起的神经行为 功能改变:采用Bederson等h3分分级方法评价小鼠神经症状;小鼠处死取脑,冠状 面切成hm厚的6片脑片,在0.5%氯化三苯四氨陛()溶液中孵育30min,将 染色脑片图像输人计算机,以AnalyPowerl.0软件计算每一脑片的梗死面积;取约 bregnaZ.0处第5脑片,制备8卜m厚的冰冻切片,进行苏木精-伊红(HE)染色, 高倍光镜下进行神经细胞计数。 实验结果表明,评价小鼠神经行为功能的爬板、悬挂试验综合评分和TTC染色 的大脑梗死体积有较好的相关性(Smpan等级相关分析,t.713,Ped.001);与 传统Bed——等q分分级方法评价的神经症状进行比较,结果较为一致(d.63, *刃.m】):用ON o!07巴干预小鼠局灶性脑缺血模型,可见局灶性脑缺血小鼠爬板、 悬挂试验综合评分值降低,大脑梗死体积减小。 以上研究表明,用悬挂、爬板试验综合评分法评价脑缺血小鼠神经行为功能所 代表的神经损伤的严重程度与大脑梗死灶大小基本对应,因此,可利用神经行为功能 综合评分等级标准初步评估脑缺血程度,为今后深人研究脑缺血模型奠定良好的基 础,有助于人类认识缺血性脑血管疾病的病理学和神经行为学的改变,也为筛选和评 价神经保护药物提供依据。